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如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？
制备色谱柱为ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为Agilent1100或LC-6A。想用其制备面积归一化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。如何设定色谱条件，如，流量、进样量、样品的浓度、切割点
液相色谱仪价格
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如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？
制备色谱柱为ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为Agilent1100或LC-6A。想用其制备面积归一化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。如何设定色谱条件，如，流量、进样量、样品的浓度、切割点的设置、是否要浓缩，要求将95%以上的主峰切除。
（主峰后有二个杂质靠得很近。）
答：
1.制备用的流动相尽量等级高一点，否则流动相中的杂质会影响LC-MS分析。
2.使用馏分收集器时，延迟体积一定要计算准确，检测器的响应时间设到很小，否则都会影响收集的纯度和回收率。制备柱的流速一般与直径的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速为1mL/min，9.4mm制备柱用1*（9.4/4.6）2,大约为4mL/min。进样量设到几个mg应该基本没有过载。进样样品浓度越高越好。假如进样10mg，理论计算0.05%的杂质大约只有5μg，显然浓度太低，尽量是多做几次，合并馏分然后浓缩后做LC-MS分析。
样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？
（1）了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。
（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂以助溶。
（3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择甲醇，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱，一般不会影响峰型。
（4）可以固体上样。
什么是色谱填料？
1. 亲水色谱填料：
主要适用于非极性至中等极性的中小分子化合物的分离，硅胶表面的硅羟基或其极性基团极性较强。主要应用于合成化学、天然产物、精细化工、石油产品等领域的分离和提纯。
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