【摘要】 目的建立一种制备甲胎蛋白单克0隆抗0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。 方法 以常规和改良两
种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄piao呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。
用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。 结果 在较短时间内，改良法能获得高0效价的免
3C蛋白酶
【摘要】 目的建立一种制备甲胎蛋白单克0隆抗0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。 方法 以常规和改良两
种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄piao呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。
用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。 结果 在较短时间内，改良法能获得高0效价的免0疫
抗0体，与常规免0疫法相比有极显著差异(P<0．001)，同时改良法的细胞融合率和抗0体阳性率也显著高于常规免0疫法
(P
常规的McAb制备中动物免0疫程序，并能成功筛选出AFP—McAb杂交瘤细胞系。
综上所述，新的改良的小鼠免0疫方法具有很好实验效果。孕妇血0清AFP水平的变化与唐氏综合征有密切关系。目前孕中期人绒毛膜促性腺激0素(HCG)联合AFP筛查唐氏综合征胎儿已成为欧美亚许多常规服务项目之一，在假阳性率为5％左右情况下，这种筛查方案对唐氏综合征的检出率可以达65％～75％[9-11|。因而免0疫方法测定血0清中AFP浓度已在临床得到广泛应用。羊水和母体血0清中AFP浓度的升高，对胎儿神经管缺陷和其他遗传缺陷的产前诊断，也具有应用价值。在大多数原发性肝细胞癌和内胚窦癌患者血0清中AFP浓度升高，检测AFP有助于肿0瘤的早期诊断，也是在治0疗过程中观察疗0效的一项指标。采用本实验新改进的方法制备AFP—McAb，对胚胎发育、癌变过程中基因表达、AFP的纯化、肝0癌的导向治0疗以及提供诊断0试剂等都有重要的实际应用意义。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度（按每针次50μl用量配制）。
备注：推荐使用的抗原用量为
（1）免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg；
（2）亚单位蛋白抗原每针次1-10μg；
（3）免0疫原性较强的灭活病原微生物和病毒样颗粒抗原每针次1-10μg；
（4）肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。
2. 37oC水浴中解冻佐剂，充分混匀，无菌条件下取出所需用量（按每针次50μl）与抗原按体积比1:1混匀。
3. 通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0注射免0疫小鼠，每只小鼠注射100μl。
4. 第7天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次免0疫佐剂和抗原现配现用
5. 第014天通过ELISPOT、胞内细胞0因子染色、MHC四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或引流淋巴0结中的抗原特异性CD4+ TH1和/或CD8+ CTL反应。
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名称：QuickAntibody-Rabbit8W
货号：KX0210045
含量：1ml
用途：通过 8 周 3 针的标准免0疫程序制备兔子多克0隆抗0体，ELISA 滴度（Cutoff 值为 0.1000）可达到
1:10000-1:1000000。
备注：常温运输，2-8oC 保存，无菌取用，有效期 18 个月。（切勿冻存！）
1. 用生理盐水将抗原稀释到 2 倍zui终浓度（按每针次 100μl 用量配制）。备注：推荐使用的抗原用量为（1）免0疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次 20-50μg；（2）免0疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次 5-10μg。
2. 充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按每针次 100μl）与抗原按体积比 1:1 迅速混匀。备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。
3. 通过后腿小腿肌肉注射免0疫兔子，每只兔子注射 200μl。备注：（1）本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快注射； （2）客户也可根据各自的实验习惯选择皮下0注射或皮内注射进行免0疫。
4. 第 21 天和第 42 天按同样方式分别加强免0疫 1 针。备注：每次佐剂和抗原现配现用，注射部位同初次免0疫。
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