材料与方法
一、材料
AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。
二、方法
1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良
核酸染料
材料与方法
一、材料
AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。
二、方法
1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。
第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射，融合前3 d作腹腔注射加强免0疫。
腹0水的纯化
采集复水后，12 000 r/min 离心 15 min，去掉 沉淀等杂质。往离心后的腹0水中加入等体积的 PBS，并添加硫酸铵固体至 50% 饱和，静置 2 h，12 000 r/min离心15 min，弃 上 清，用 PBS 重 新 溶 解 沉 淀，然 后 再次加入硫酸铵固体至 45% 饱和，静置两个小时左右，12 000 r/min 离心 15 min 弃去上清，用少量 PBS 溶解沉淀，即得到较纯的抗0体，对 PBS 透析除去硫酸铵，透析时间为24 h，透析过程中更换透析液两至三次。
原理
新型乳剂是一种具有自主知识产权、独0特配方的新型油包水佐剂，用于免0疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、多克0隆抗0体。该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础，添加了多种具有强免0疫刺激0活性的TLR配体。新型佐剂与常规使用的弗氏佐剂相比，具有以下优点：
（1）新型乳剂活性强于弗氏不完全佐剂；
（2）与弗氏完全佐剂不同，不含有干扰免0疫应答的无关蛋白成分；
（3）安全性好，副反应率低；
（4）免0疫针次少、抗原用量低等多方面优点。
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甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白，分子量约70，000～72，000道尔顿^，在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成，正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿，亦见于其他多种畸形，如先天0性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等∽J。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏综合征有密切关系一。。因此制备高0效特异的AFP单克抗0体(McAb)具有重要的意义。
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