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液相色谱法概述
液相色谱根据分离机理的不同可分为:
液固吸附色谱
液液分配色谱
离子交换色谱
离子对色谱法
分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)
(一)液-固吸附色谱
流动相为液体,固定相为固体吸附剂,根据物质吸附作用的不同来分离物质。
(二)液-液分
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液相色谱法概述
液相色谱根据分离机理的不同可分为:
液固吸附色谱
液液分配色谱
离子交换色谱
离子对色谱法
分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)
(一)液-固吸附色谱
流动相为液体,固定相为固体吸附剂,根据物质吸附作用的不同来分离物质。
(二)液-液分配色谱
流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱,是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相,另一种是涂于载体上的固定相。
流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。
流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。
(三)离子交换色谱
(四)离子对色谱法
(五)分子排阻色谱法
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液相色谱柱压升高的原因是什么?
造成柱压升高的原因很多。一般是由于柱床内产生了异常的占位性物体,造成流体阻力加大所引起的。例如,缓冲液盐分如(铵等)沉积于柱内,或样品污染沉积。针对种情况,处理时应先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成冲洗,接着用+异(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成冲洗,然后用纯水冲洗,冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
液相色谱法可以不做标准曲线吗?
首先要明确做标准曲线的目的,一般是为了含量测定作为标准品来用。液相色谱的浓度和峰面积成正比,样品的含量未知,浓度也就未知,峰面积可读。那么这时需要一个已知含量和已知峰面积的对照品。这个时候做不做标准曲线要看试验方法,有的方法是外标法,也就是和你样品浓度一样的对照品,平行配制两个,进样分析。有的方法是内标法,就需要样品中添加内标物。还有的面积化,那就什么对照都不要进了。方法要看你的质量标准,上面应该有计算方法,上面写的是什么,就按照什么来做。不是非标准曲线不可的。
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