细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能
动物细胞培养
细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照
结果示例:
图 A 细胞划痕实验图;B,C 细胞迁移和侵袭实验图
yao物对细胞的IC50检测
IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。6%低熔点琼脂糖与2x细胞培养基以1:1的体积比混合,制备0。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解为一定浓度的某种药wu诱导肿liu细胞凋亡50%,该浓度称为50%抑制浓度,即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度,IC50值可以用来衡量yao物诱导凋亡的能力,即诱导能力越强,该数值越低,当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。
选择实验外包公司需要注意哪些事项?
技术支持
尽量有专门的技术负责对接项目,或者有技术服务群。随时沟通项目问题,定期汇报实验进展。这样能把控实验进度,结果数据有疑问也可以交流,不要实验做完就没人管了。
实验数据
明确提供实验原始数据、原始图片,并有保密协议不外传数据和客户的信息。5ml生物素化抗ti(Bio-Ab)(2μg/ml),37℃孵育1h或4℃过夜,弃掉液体,PBS-T洗涤3次,每次3min。确保实验结果的完整性、唯独性、真实性。这也是找实验外包很关心的原则。另外结果尽量有实验报告形式,包含所用材料、实验步骤和结果统计分析,方便写文章时直接使用。另外实验都是有不确定性的,如果外包公司能保证一定能做出预期的结果,那多半是不靠谱的。做实验不怕出问题,的外包公司会负责到底,有问题反馈再处理就好。
关于细胞培养的常见问题:
Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理?
A: 贴壁细胞在移除原培养液后,用 PBS 冲洗 2-3 遍;悬浮细胞离心移除原培养液后,加入 PBS 重悬,离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍,用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
Q:细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗?
A:长期保存的细胞应当放在液氮(-196℃)中保存,短时间(一般 1 周-2 周)可以存放在 -80℃。
Q:培养瓶是用密封盖好,还是用透气盖好?
A:都可以。只是在使用密封盖培养瓶时,瓶盖旋至约 2/3,不要完全拧紧,预留约 1/3 以便细胞可以透气;有些的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS
A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别,都是指胎牛;FCS 不是正规命名,尽量不使用。Calf Serum(CS)则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。
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