肺缺血再灌注损伤是由于机体组织或在缺血再灌注后导致肺组织迅速损伤。缺血再灌注可能发生在肺，也可能是下肢或腹主动脉等，导致肺泡上皮细胞和肺毛细胞血管内皮细胞受损。
究其原因可能与组织细胞聚集、氧自由基产生和促炎因子释放等病理生理反应有关。
结扎法制备肺缺血再灌注损伤模型常用，因其操作简单、成功率高、实用性强，是研究肺缺血再灌注损伤发病机制和防治保护的关键。
制备
动物尿液检测
肺缺血再灌注损伤是由于机体组织或在缺血再灌注后导致肺组织迅速损伤。缺血再灌注可能发生在肺，也可能是下肢或腹主动脉等，导致肺泡上皮细胞和肺毛细胞血管内皮细胞受损。
究其原因可能与组织细胞聚集、氧自由基产生和促炎因子释放等病理生理反应有关。
结扎法制备肺缺血再灌注损伤模型常用，因其操作简单、成功率高、实用性强，是研究肺缺血再灌注损伤发病机制和防治保护的关键。
制备肺缺血再灌注模型我们选用适龄的SD大鼠，通过结扎手术进行造模。
原位杂交涉及的步骤：玻片的准备和样品固定，细胞或组织的预渗透处理，靶DNA变性（DNA原位杂交），探针制备，原位杂交过程，杂交后洗涤，探针（显色）检测。
玻片的准备和样品固定
对于染色体涂片，1：1的乙醇/醚处理的载玻片已能符合要求。对于组织切片的原位杂交，为了在实验过程中不丢失组织样品，可使用多聚赖氨酸或铬矾明胶包被的载玻片。
样品的固定步骤是为了保持样品的原有形态学。样品固定是原位杂交中的步骤，从化学反应角度来看，固定剂的使用和选择对后续杂交的影响不会太大，因为核酸杂交的功能分子基团被安全地包裹在DNA双螺旋结构中，而交联剂的使用对RNA基本没有影响。对于染色体涂片，常使用/固定；石蜡包埋的组织切片用固定。冷冻切片可通过在4%的甲醛溶液中固定30min，或使用Bouin固定剂。
在进行研究前，确定应用的探针类型。不同探针类型的优劣势请见上文描述。DNA探针的制备包括了前期的DNA片段分离纯化（或cDNA的）和酶促探针标记，可选随机引物标记法和缺口平移法等。RNA探针的制备包括了转录载体和转录法探针标记。寡核苷酸探针的制备要求先获得合成的寡核苷酸片段，再进行末端标记或加尾法探针标记。但无论采用何种标记探针及标记方法，对探针标记效果需进行终的评估，并准确计算探针浓度。
原位杂交过程
杂交前可进行预杂交，以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同，只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。
靶DNA的变性（对mRNA的原位杂交无需此步）
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤，但同时可能会造成样品形态学的部分破坏，此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性，实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。
如使用热变性方法，可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行：将样品和探针溶液加盖盖玻片，置于烘箱80℃变性，染色体DNA样品处理2min，后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。
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