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多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？

一般会有一定的变化，原因有以下几点：

（1）制备柱的装填是否均匀，如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样，停留时间不同，色谱峰可能变宽。

（2）如果样品在流动相中溶解度小，在制备色谱上会有不同的峰展宽。

（3）如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象，放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重，导致分离失败。

气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）

工作温度

由于化合物的热不稳定特性，HPLC操作通常在环境温度下进行，比如操作时将液相色谱柱放入恒温箱中使用。而气相色谱柱操作的环境温度并不苛刻。

工作压力

由于液体具有较高的密度和粘度，因此对于常见的分析分离，需要在5000 – 6000 psi范围内的较高压力。UHPLC系统能够在15,000 – 18,000 psi的范围内运行。GC色谱柱中的载气要求在150 – 200 psi范围内的较低压力即可。

常见色谱填料

色谱理论认为，不同的物质之间，只要存在物理、化学或生物学性质的差异，就会在不同的物相上具有不同分配系数，即可在色谱过程中得到分离、分析或测定。如果说，色谱柱是进行色谱分离的主要场所，人们常将其比喻为色谱仪的心脏；那么，色谱填料就是组成心脏的一个个细胞，因此，色谱填料的性质决定了色谱柱的性能。

根据不同的基质，色谱填料可分为：有机聚合物填料、无机基质填料、有机-无机复合型填料。目前，无机基质填料仍牢牢占据大部分市场，主要包括硅胶、氧化铝、羟基磷灰石、活性碳等。