ELISA试剂盒的操作方法——间接法
以下是北京中检维康生物技术有限公司为您一起分享的内容，北京中检维康生物技术有限公司供应ELISA试剂盒，欢迎新老客户莅临。
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗
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ELISA试剂盒的操作方法——间接法
以下是北京中检维康生物技术有限公司为您一起分享的内容，北京中检维康生物技术有限公司供应ELISA试剂盒，欢迎新老客户莅临。
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二（抗）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.然后用DDW洗涤。
其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。
ELISA试剂盒——ELISA实验通用规则
1、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
2、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
3、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
4、底物是光敏感的，要在临用前现配。
5、检测前，要打开酶标，使之稳定10分钟以上。
6、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
7、待检样品要澄清，否则会影响结果。
8、温浴时间应遵守试剂盒规定。
9、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
10、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
Elisa试剂盒的安全性
8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
2. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
3. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
4. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
5. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）
1 洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。
2 底物污染，未避光保存，出现颜色 弃去底物，重新配置
3 样品稀释液污染 弃去稀释液，重新配置
4 吸头重复使用，未洗净或消毒不 吸头尽可能一次性使用
5 不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间） 常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求。
6 偶联抗体（streptavidin-HRP）浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度
7 ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板
8 没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间
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