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{微生物检测}微生物分离纯化 含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixed culture)。2、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落(colony)。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养(pureculture)。在进行junzhong鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，
纯化水微生物分析方法验证


{微生物检测}微生物分离纯化









含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixed culture)。2、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落(colony)。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养(pureculture)。在进行junzhong鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。

1、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50℃左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。3、v-p试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酸，丙酸缩合，脱羧成乙酰，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称v－p(+)反应。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。

2、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃guadao把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。

3、平板划线法

zui简单的分离微生物的方法是平板划线法。它的做法是：用接种针蘸取少量的junzhong，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、fangshe法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。








抑菌效力

根据产品类型，在供试品刚接种（0时）及表2规定的间隔时间，分别从上述每个容器中取供试品1ml（g），用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释成1:10、1:102、1：103等稀释级。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。采用平皿法（照附录Ⅺ J微生物限度检查法，其中测定细菌用胰酪胨大豆琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基）测定每份供试品中所含的菌数。

8.6.2根据菌数测定结果，计算1ml(g)供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。














微生物限度检查






1.平皿法

平皿法包括倾注法和涂布法。除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3～5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5～7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

菌数报告规则 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。小解剖刀常用的接种方法有以下几种：1、划线接种这是zui常用的接种方法。取zui高的平均菌落数，计算1g、1ml或10c㎡供试品中所含的微生物数，取两位有效数字报告。

如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅zui低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 时，以<1 乘以zui低稀释倍数的值报告菌数。





非无菌药品微生物限度标准









非无菌药品微生物限度标准

非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。接种、培养是食品微生物应用、研究过程中基本和必不可少的方法。药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及中药提取物的检验，新药标准制订，进kou药品标准复核，考察药量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。

1.制剂通则、品种项下要求无菌的及标示无菌的制剂和原辅料

应符合无菌检查法规定。

2.用于手术、严重烧shang、严重创伤的局部给药制剂


3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准见表1。












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