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水佐剂免0疫步骤
步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
慢病毒滴度检测卡
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水佐剂免0疫步骤
步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
步骤二:充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。
步骤三:通过后腿小腿肌肉注0射免0疫小鼠,每只小鼠100μl。备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,抽入针管后应尽快注0射。
步骤四:第21天按同样方式加强免0疫一针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。
步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定,抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内, 随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注:若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求,可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。
1、水佐剂不破坏抗原天然构象,从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体,这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。
2、水佐剂是一种水溶性佐剂,使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程,抗原和佐剂只需简单混合即可用于免0疫动物。
3、水佐剂使用肌肉免0疫途径,与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫免0疫或脾内免0疫相比,极大地方便了使用。
4、水佐剂的zui重要用途是可方便地用于制备小鼠多克0隆抗0体。常规多克0隆抗0体制备多使用兔子,不但免0疫针次多、抗原用量大和抗0体产生慢,而且由于技术要求较高而往往需要委托外单位制备。使用水溶免0疫佐剂,任何动物实验人员均可方便地制备小鼠多克0隆抗0体,只需要简单地免0疫5只小鼠,即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克0隆抗0体。
5、水佐剂建议室温运输,2~8oC保存,无菌取用,有效期6个月。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
抗0体是具有4条多肽链的对称结构,其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链);2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种,重链有μ、δ、γ、ε和α五种。 整个抗0体分子可分为恒定区和可变区两部分。在给定的物种中,不同抗0体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。
人出生前,体内已经有分化成熟的B细胞并分布在血液和淋巴中。B细胞成熟的标志是:它们的细胞膜上有了球蛋白样结构形式的特异性抗原受体。出生后,在中以每天100万个的速率产生B细胞。在抗0体方面,新生儿不能产生抗0体,其血浆中的IgG是胎儿时期由母体经转运到胎儿血循环中的;出生3个月后,在外周血中开始能检测出他自身产生的抗0体;1岁时,血液中IgM含量可达到成人的水平;6~7岁时,IgG和IgA也达到了成人的水平。
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