细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)高亲和力特异性结合。以融合蛋白Annexin Ⅴ-EGFP作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发
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细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)高亲和力特异性结合。以融合蛋白Annexin Ⅴ-EGFP作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
注意事项
1.为保证得到理想的实验结果,在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项;
2.试剂(尤其是小瓶装的试剂)在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落;
3.Propidium iodide(PI)能通过皮肤吸收,睛有刺激作用;
4.此试剂盒仅供科研使用,不宜用于临床诊断;
5.细胞的洗涤同常规方法。
3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验实验步骤:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白质量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白质的毫摩尔数。
2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中,加入足够量浓度的生物素,一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数,对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍,或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室温30分钟,或冰上放置2小时。
4. 用30 ml PBS预洗纯化柱,上样,加入与欲收集量相同的缓冲液,收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。
与骨汤中的其他氨基酸(尤其是脯氨酸)一起,甘氨酸在胶原蛋白的形成中发挥作用,促进关节、肌腱和韧带的生长和功能。大约三分之一的胶原蛋白由甘氨酸组成,而胶原蛋白对于形成保持关节灵活并能够承受冲击的结缔组织至关重要。这就是胶原蛋白水解物常用于骨等退行性关节疾病的原因。随着人们年龄的增长,摄入足够的蛋白质(氨基酸)以修复因持续自由基损伤而受损的关节内组织尤为重要。研究表明,甘氨酸对于形成有弹性、灵活的至关重要,有助于受损的关节,并可以防止老年人丧失活动能力和功能。
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