不管是哪一种ELISA，它的操作都由以下几种基本的操作组合而成：①将抗原或抗体吸附到固相载体上；②加入待检样品以及后续试剂；③温育；④洗涤去掉游离未结合的反应物；⑤加入酶检测底物；⑥结果的判读。
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多。
测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。
测定大分子量
CAMP/CGMP 代检测
不管是哪一种ELISA，它的操作都由以下几种基本的操作组合而成：①将抗原或抗体吸附到固相载体上；②加入待检样品以及后续试剂；③温育；④洗涤去掉游离未结合的反应物；⑤加入酶检测底物；⑥结果的判读。
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多。
测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。
测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线ZUI高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，较呈直线的部分是ZUI理想的检测区域。
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多抗体和使用杂交瘤技术得到的单抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。
影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量的保证才能充分发挥其方法学的优点。
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