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实验步骤:
1、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
2 、吸弃板内液
腺病毒滴度检测
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实验步骤:
1、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
2 、吸弃板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl,换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。
3 、ELISA试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果,看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液(每孔50μl)终止反应后用酶0标仪450nm 测长,630nm 参考波长双波长测定结果,参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8,阴性对照一般不高于0.15,阳性判定标准:样品 OD 大于阴性 OD+0.15,阴性 OD 0.05按0.05算)。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
多抗制备的概念:由多个B淋巴细胞克0隆所产生的,受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗0体。多抗制备主要包括以下几个步骤:免0疫动物、佐剂、免0疫原、免0疫、取血等。
多抗制备的制备步骤
一、器材
剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼0科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼0科手术剪(剪血管用)一把,手术刀架,手术刀片,注0射器(1ml、10ml,25ml)附针头,兔子固定架,灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把,直头止血钳两把,手术缝合线,塑料放血管,纱布等。
二、试剂
生理盐水
弗氏完全佐剂
弗氏不完全佐剂
二甲0苯,酒精棉,脱脂棉,2% NaN3
三、免0疫原:蛋白或KLH偶联的多肽。每次免0疫100-200μg免0疫原。
四、兔子的选择
兔子的重量应在四斤以上,两耳光滑,明显可见耳静、动脉,健康。
五、免0疫
用生理盐水稀释免0疫原,然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂,将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下0注0射和后大腿进行肌肉注0射。每个区域大约用1/4的免0疫原。这样免0疫原可以持久存在从而提高免0疫应答。
注:
抗原注0射以前需要收集一些正常血0清,已备检测抗0体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定,大概需要四天左右时间,可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。
免0疫用的抗原必须纯化,否则影响抗0体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注0射。将抗原液与佐剂等比例混合后,置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化,乳化过程比较费时、费力,但若乳化不充分,会影响免0疫的效果,振荡后,1000rpm离心一分钟,如水相和油相不分层即可注0射。首0次免0疫用FCA,以后都用FIA。
免0疫方法可采用背部多点注0射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下0注0射,每点注0.1ml,间隔2周后再于上述部位选不同点注0射(不要选择临近位点,否则溃疡愈合不好)。每次免0疫的抗原量约100μg。免0疫次数在四五次即可,抗原用量大可以减少次数。
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