TwistDx
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。近年来，等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。
等温扩增技术的基因诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测试剂检测病原微生物的一种技术。
包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶基
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TwistDx
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。近年来，等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。
等温扩增技术的基因诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测试剂检测病原微生物的一种技术。
包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶基因数据库的建立;生物信息学的分析比较;基因组多态性的分型处理和简并碱基的运用,获得各种靶基因的特异性引物两对,分别与靶基因中的六个独立区域序列特异性匹配;三、进行等温扩增反应;四、分析判断结果。该方法的优点:不需特殊试剂与设备;高特异性;.灵敏度高;鉴定简便;用途广: 可用于食品、药品、化妆品等领域的质量控制和环境、水质等监测;用于医学临床诊断,用于代谢性疾病和遗传疾病的基因诊断。
RPA技术的基本原理
RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，TwistAmp exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。
RPA技术
01 特别快，传统PCR要45分钟，因为要反复升温降温。RPA由于是恒温，所以只需要3-10分钟。
02 灵敏度高，因为是高度定向扩增，所以样品即便有点儿杂质也OK，免除了前处理环节，尽量多的保留了样本。
03 温度控制要求低，一般是加热到40℃，但是在紧急情况下，贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃，也是可以运行，就是慢点儿，要等一个小时而已。
04 适用性强，面对RNA病毒，直接在试剂里加入逆转录酶就好，一锅端。
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