原位杂交过程
杂交前可进行预杂交,以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同,只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。
靶DNA的变性(对mRNA的原位杂交无需此步)
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤,但同时可能会造成样品形态学的部分破坏,此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性,实验时可以摸索变性时间、
动物全自动生化检测
原位杂交过程
杂交前可进行预杂交,以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同,只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。
靶DNA的变性(对mRNA的原位杂交无需此步)
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤,但同时可能会造成样品形态学的部分破坏,此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性,实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。
如使用热变性方法,可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行:将样品和探针溶液加盖盖玻片,置于烘箱80℃变性,染色体DNA样品处理2min,后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。
动物实验发展的目的,就是要通过对动物本身生命现象的研究,进而推用到人类,探索人类的生命奥秘,控制人类的疾病和衰老,延长人类的寿命。随着医学生物科学的突飞猛进发展,认识到公害问题不仅已成为粮食、人口、老年人等的重大社会问题,而且还涉及到地球上生活着的动物生存问题,例如产业公害、食品公害、药品毒性等,均直接影响人体健康,对这些问题的研究,必然要通过动物实验(包括动物疾病模型的开发等)来阐明解决。因此,实验动物科学,特别是实验动物的重要性愈来愈被人们所认识,它已被认为是人类追求幸福生活的支柱,故实验动物科学亦被称之为生命科学;为此,对实验动物科学的发展,均给给予高度的重视,其投入的经济物资和技术力量,几乎可同发展原子能科学相提并论,其重要意义可想而知。

肝纤维化动物模型法:
180~200g Wistar或SD大鼠,皮射40%-50%CCl4,油溶液(0.3ml/100g),每周2次,第2周 始,隔日以20%-30%酒精lml灌胃(或作为饮料),饲以单纯玉米面(混以0.5%胆固醇),共10周。
评价:第2周出现小叶中心小片状肝细胞变性坏死, 第4周开始有较薄的纤维间隔形成,第6周间隔进一步增厚,有假小叶形成:第8周形成厚的纤维间隔,分割形成假小叶。大鼠成活率60%-80%。
该模型是目前国内外常采用的动物模型,可靠且时间短,肝纤维化进展稳定,适合于过程的动态研究。
肝纤维化动物模型造模方法:
1.法:
性肝纤维化产生的机理是Ⅲ型反应引起,白蛋白和的大分子物质,作为异种抗原进入大鼠体内后,刺激其产生相应的,当抗原再次进人机体后抗原结合,形成抗原—复合物(IC),抗原的反复、长期刺激,过量的复合物来不及被清除,沉积于的血管壁内外,引起血管炎,造成肝损伤。反复导致肝细胞变性、坏死,再生,纤维等变化,后发展为肝纤维化、。
动物选用雄性Wistar大鼠,体重130g左右。取猪0.5ml,腹腔内注射,每周2次,共8次(猪的制备:取新鲜猪血,离心制,滤过,分装放低温冰箱备用)。
评价:
大鼠第3周出现肝细胞变性、坏死,第4周的胶原纤维形成纤维束,从静脉到门管区之间相互伸延,发生纤维化。

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