RPA技术的基本原理
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩
TwistAmp exo价格
RPA技术的基本原理
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针,就可以实现多样化的RPA应用。举例来说,TwistAmp exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III,能实现数据的实时读取,就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来,可以一步实现RNA模板的实时扩增。
TwistDx试剂盒
2018年,TwistDx推出了一系列全新的液态重组酶聚合酶扩增 (RPA)试剂盒,这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 DNA/RNA 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。
TwistAmpLiquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂,该形态对于在实验室执行 PCR 和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中,用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积,配制用于多次反应的预混液,或者以各种 RPA 组分比例进行实验以优化试验。
除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp RPA试剂盒这一旗舰产品,本次新推出的TwistAmp Liquid试剂盒是现场试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用简单的RPA法(该方法有时甚至采用与PCR相同的引物)取代 PCR法,以及更容易地开发出定制的试验。
TwistDx Liquid试剂盒
TwistDx试剂盒的相关概述
RPA 作为颠覆 PCR 的革命性方法的突出地位源于其特定的反应成分(表 1)和机制。 对于成功的 RPA 分析,细微差别取决于内在因素、引物、探针和核酸模板的设计; 并且与外在因素有关,如反应温度和搅拌、对错配的耐受性、和模板DNA。 此外,RPA 过程中的核酸标记、RPA 扩增子纯化和扩增后处理也是 RPA 检测成功的重要细节。 本节提供从 RPA 文献中总结的这些实用信息,作为 RPA 检测设计的指南。
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