cAMP作为的第二信使，可调节细胞对各种外源和内源信号分子的反应。 它主要通过激l活蛋白激酶、控制特定的离子通道、磷酸二酯酶调节细胞环核苷酸浓度以及激l活Epac(通过cAMP直接激l活蛋白交换)(3-6)来调节生理过程。通过腺苷酸环化酶可以实现ATP转化为cAMP。 哺乳动物体内的主要腺苷酸环化酶家族均是横跨膜的，具有9个亚型，且可通过G蛋白Gs或钙离子/钙调
cAMP ELISAkit
cAMP作为的第二信使，可调节细胞对各种外源和内源信号分子的反应。 它主要通过激l活蛋白激酶、控制特定的离子通道、磷酸二酯酶调节细胞环核苷酸浓度以及激l活Epac(通过cAMP直接激l活蛋白交换)(3-6)来调节生理过程。通过腺苷酸环化酶可以实现ATP转化为cAMP。 哺乳动物体内的主要腺苷酸环化酶家族均是横跨膜的，具有9个亚型，且可通过G蛋白Gs或钙离子/钙调素(1)激l活。另外，还有一种可溶性的腺苷酸环化酶，可以通过碳酸盐或Ca2 +调节(7)。
实验步骤
使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
加入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。
2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。
4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。
5. 移取100μL样品至相应的孔。
6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。
11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。
12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。
13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）
14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。
武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往世界。
注意步骤
在使用前，将所有试剂放置30分钟，平衡至室温。
用试剂预先润洗头在使用；取各种样品、标准品和试剂必需更换头。
移取标准品和样品到微孔底部。
从微孔的边缘加入试剂，以避免污染。
该试剂盒使用可拆分的微孔酶标条，使用者可根据样品量多少进行拆分。未使用的酶标条保持干燥，密封于试剂盒提供的铝封袋中，于4℃保存。微孔酶标条需安装在相应的框架上使用。
在加入显色底物前，确保微孔内没有残留的洗涤液。微量残留的洗涤液可能导致分析结果的变化。
Ras活性分析。纯化的Ras蛋白分别用GDP (Lane 1)和GTPγS (Lane 2)进行活化。然后用特异性识别Ras活性构象的鼠单克l隆抗l体(Cat. # 26909)孵育。活性Ras珠子颗粒用特异性识别Ras活性构象的兔多克l隆抗l体(Cat # 21021)进行免l疫印迹实验。图展示的是Ras-GDP和Ras-GTPγS的Western blot实验结果。
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