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为啥要学习使用液相色谱柱?
色谱柱的使用和保养:液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成,其中液相色谱柱的正确安装和使用,是液相色谱工作的关键;也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路,建立液相色谱柱日常维护与保养规程,保证能正常使用。
液相色谱柱的适用范围:
本规程适用液相
东曹C4-300反相色谱柱采购
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为啥要学习使用液相色谱柱?
色谱柱的使用和保养:液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成,其中液相色谱柱的正确安装和使用,是液相色谱工作的关键;也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路,建立液相色谱柱日常维护与保养规程,保证能正常使用。
液相色谱柱的适用范围:
本规程适用液相色谱柱的维护与保养。
责任人:
液相色谱柱使用者。
液相色谱仪与气相色谱区别
液相色谱仪在基本原理上和气相色谱仪是一致的,所以设备的基础原理差不多,但是他们在检测方面是有不相同的地方的,有不相同的,但又有不同之处:液相色谱 与气相色谱的主要区别可归结于以下几点:
1、进样方式的不同:液相色谱仪只要将样品制成溶液,而气相色谱需加热气化或裂解;2、流动相的不同,在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力;
3、由于液体的粘度较气体大两个数量级,使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中约小4~5个数量级;
4、由于流动相的化学成分可进行广泛选择,并可配置成二元或多元体系,满足梯度洗脱的需要,因而提高了液相色谱的分辨率(柱效能);
5、液相色谱采用5~10Lm细颗粒固定相,使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小,流动阻力增大,必须借助高压泵输送流动相;
6、液相色谱仪是在液相中进行,对被测组分的检测,通常采用灵敏的湿法光度检测器,例如,紫外光度检测器、示差折光检测器 、荧光光度检测器等;
7、液相色谱与气相色谱相比较,液相色谱同样具有高灵敏度、能和高速度的特点。
8、液相色谱的定性和定量分析,与气相色谱分析相似,在定性分析中,采用保留值定性,或与其他定强的仪器分析 法连用;在定量分析中,采用测量峰面积的化法、内标法或外标法等,但液相色谱在分离复杂组分式样时,有些组分常不能出峰,因此化法定量受到限制,而内标法定量则被广泛使用。
色谱柱的清洗溶剂
下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序,作为参考:硅胶柱以正已烷(或庚烷)、和依次冲洗,然后再以相反顺序依次冲洗,所有溶剂都必须严格脱水。能洗去残留的强极性杂质,已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、、、(或)依次冲洗,再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液,那么可以省略用水冲洗这一步。能洗去残留的非极性杂质,在()冲洗时重复注射100~200μl四氢数次有助于除去强疏水性杂质。四氢与或的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外,用、和三(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗,阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗,除去交换性能强的盐,然后用水、、(除去吸附在固定相表面的有机物)、、水依次冲洗。
保存色谱柱时应将柱内充满或,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如