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高效液相色谱

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ﹨ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。

HPLC概述

高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项高效、的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。

与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。

高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。

高效液相色谱与光谱技术联用方法的研究也一直是色谱学科的研究热点。20世纪80年代，可同时得到每个组分HPLC-UV三维谱图的二极管阵列检测器（DAD）问世，对紫外-可见光谱的扫描检测，使液相色谱能提供的信息大幅度增加，为模式识别等化学计量学中的许多手段提供了重要的应用领域。90年代以后，HPLC-MS、HPLC-FTIR等色谱-光谱联用技术逐渐成熟，为解决HPLC定性问题提供了多种实用、有效的手段。

为适应生命科学的发展，以制备色谱为主要对象的非线性色谱获得了长足的发展，人们运用色谱法已能够制备微量而贵重的生物活性化合物。而为了满足天然产物分离制备、生物制药等方面的需要，大规模的工业色谱技术、模拟移动床色谱技术得到发展，目前，日处理量达到千克级的液相色谱系统已经随处可见。

HPLC分析流程图

现代HPLC一般都做成一个个单元组件，然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来。

基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统(目前基本上为色谱工作站，记录仪和积分仪已很少见)。

此外，还可根据需要配置流动相在线