PCR技术的本质是体外核酸扩增,加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
普通的PCR仪
一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。
pcr检测仪
PCR技术的本质是体外核酸扩增,加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
普通的PCR仪
一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。
用途:主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的基因进行扩增。
(1)梯度PCR仪: 一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常为12种温度梯度的普通PCR仪。
用途:研究未知DNA退火温度的扩增。
(2)原位PCR:将具有细胞定位能力的原位杂交技术运用于从细胞内靶DNA的定位分析,在细胞内实现基因扩增的普通PCR仪。
用途:用于在细胞的靶DNA所在位置上进行基因扩增。
地中海(Thalassemia)是一种遗传性慢性溶血,是世界上常见且发病比高的一种单基因遗传病。在两广、贵州、四川等地发病率较高,在广西等地高达15%。地中海是由于基因突变造成珠蛋白的不平衡,使结构正常的肽链合成量减少甚至没有合成表现为溶血性。接受累基因种类分为α、β、γ等,其中以 α、β地贫为常见,危害了大。珠蛋白基因簇位于人6号染色短臂上,有两个重复基因基因位于α1、α2、两个α基因及其旁侧序列有很大的同源性,易出现染色体不等交换,导致α基因缺失-α地贫。α地贫基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同时缺失及非缺失型地贫。可以应用PCR技术扩增α1、α2基因从而检测这些基因是否缺失、突变等,从而对α型地中海作出诊断。β地中海基因缺陷主要表现为基因序列中单一核苷酸的突变,或少数碱基的缺失、插入,使正常β珠链合成减注或缺失。应用位点特异性寡核苷探针(Aso)进行PCR产物斑点杂交即可对其作出诊断。

当PCR循环阶段完成后,PCR扩增仪通常被设置为将样品“保持”在4℃,直到用户将其从仪器中取出。
将样品块冷却到这个温度,特别是长时间的冷却,会给样品块带来不必要的压力,并有可能使其寿命缩短10倍之多。为了避免这种情况,可以在程序结束后立即取出样品,或者将仪器设定为在室温下保持样品。
这对PCR产物的影响应该是小的,因为DNA在室温下是相对稳定的。此外,在低温下保持样品块,可能会导致冷凝水的积累。这不仅可能导致块状物本身的腐蚀,还可能损坏仪器内部的电气元件。
因此,当仪器不使用时,将PCR扩增仪的盖子打开,让任何积聚的冷凝水蒸发,是一个好的做法。

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