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水佐剂免0疫步骤
步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
病理组化
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水佐剂免0疫步骤
步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
步骤二:充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。
步骤三:通过后腿小腿肌肉注0射免0疫小鼠,每只小鼠100μl。备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,抽入针管后应尽快注0射。
步骤四:第21天按同样方式加强免0疫一针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。
步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定,抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内, 随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注:若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求,可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
什么是单克0隆抗0体?
单克0隆抗0体(MAb),是针专一的抗原决定簇产生的抗0体,单克0隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年,由G.Khler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗0体的B细胞与肿0瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗0体。
单克0隆抗0体制备的原理是什么?
要制备单克0隆抗0体需先获得能合成专一性抗0体的单克0隆B淋巴细胞,但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨0髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交技术使骨0髓瘤细胞与免0疫的淋巴细胞二者合二为一,得到杂0种的骨0髓瘤细胞。这种杂0种细胞继承两种亲代细胞的特性,它既具有B淋巴细胞合成专一抗0体的特性,也有骨0髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性,用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群,可制备抗一种抗原决定簇的特异单克0隆抗0体。
单克0隆抗0体的大量制备
单克0隆抗0体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
1、体内诱生法 取Balb/c小鼠。
首先腹腔注0射0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克0隆抗0体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注0射器抽取腹0水,即可获得大量单克0隆抗0体。
2、体外培养法
将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克0隆抗0体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克0隆抗0体。但这种方法产生的抗0体量有限。近年来,各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗0体的生产量。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
抗0体是具有4条多肽链的对称结构,其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链);2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种,重链有μ、δ、γ、ε和α五种。 整个抗0体分子可分为恒定区和可变区两部分。在给定的物种中,不同抗0体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。
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