转染试剂简介:
其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注0射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注0射,不适合大量细胞研究的需要。
人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染试剂。由于脂质类转染试剂对细胞的毒性是
转染试剂盒
转染试剂简介:
其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注0射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注0射,不适合大量细胞研究的需要。
人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染试剂。由于脂质类转染试剂对细胞的毒性是由其脂质特性决定的,众多的研究者和生物公司将新一代转染试剂的开发聚焦在非脂质体的聚合物上,并已有一些优0秀的试剂产品上市。

已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15);转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小,脂质体这些作用是造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。这已引起了许多研究者的注意。

注意事项:
1. 质粒 DNA:请用能够去除内毒0素的方法制备高质量的质粒 DNA。
2. 稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,用低内毒0素纯水配制,高压消毒或除0菌过滤。
3. 培养基:经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试,推荐使用含 5~10%牛血0清的
DMEM,若转染效果不理想可尝试其它培养基。
4. 以 24 孔细胞板转染实验为例,推荐每孔低内毒0素质粒 DNA 用量为 2μg、转染试剂用量为 3~5μl,请
在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。
5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系,可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染,从而可节省
18~24 小时的转染前细胞培养时间。

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