在McAb的研制过程中,动物免0疫是McAb制备过程中的关键步骤。但是传统动物免0疫方式通常需要二个月左右,不但耗时长,而且抗原消耗的量大、对抗原纯度要求高。本实验试图通过优化传统免0疫小鼠的方法,大大缩短动物免0疫时间并减少了抗原的消耗量,为进一步组装患者肿0瘤组织及血0清中AFP水平检测的试剂盒打下良好的基础,为临床研究、肿0瘤的诊治提供更为有效的工具。
试剂与仪器
fu水制备
在McAb的研制过程中,动物免0疫是McAb制备过程中的关键步骤。但是传统动物免0疫方式通常需要二个月左右,不但耗时长,而且抗原消耗的量大、对抗原纯度要求高。本实验试图通过优化传统免0疫小鼠的方法,大大缩短动物免0疫时间并减少了抗原的消耗量,为进一步组装患者肿0瘤组织及血0清中AFP水平检测的试剂盒打下良好的基础,为临床研究、肿0瘤的诊治提供更为有效的工具。
试剂与仪器
试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合试剂 50% PEG 购自美国 Sigma 公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP) 标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠,本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 由南京大学赠送,融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他试剂均为国产分析分析纯。
仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材,96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液qiang( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱
分类
1.生物性佐剂是细菌或其产物,其本身具有免0疫原性,如分枝杆0菌(结0核杆0菌、卡介苗)、短小棒状杆0菌、百0日咳杆0菌、革兰阴性杆0菌内毒0素等。此外发现粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-l、白细胞介素-2、干扰素-γ等的佐剂活性。2.无机佐剂如氢氧化铝、明矾、磷酸铝等。3.人工合成佐剂双链多聚肌苷酸、胞苷酸、双链多聚腺苷酸。4.油剂花生油乳化佐剂、矿物油、植物油、羊毛脂等。5.弗氏佐剂弗氏佐剂又分弗氏不完全佐剂和完全弗氏佐剂,是目前动物实验中zui常见的佐剂,但易在注射局部形成肉芽肿和持久性溃疡,因此不适用于人体使用。近年来,人工合成胞壁酰二肽作为卡介苗细胞壁中的一种成分,用于提高疫0苗的接种效果,是对人体无不良反应的有效佐剂。
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