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液相色谱

液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中．为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。经典液相色谱的流动相是依靠重力缓慢地流过色谱柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分离后的样品是被分级收集后再进行分析的，使得经典液相色谱不仅分离效率低、分析速度慢，而且操作也比较复杂。

什么是液相色谱

液相色谱的定义是二十世纪早期由俄罗斯植物学家 MikhailS. 茨维特提出的。他先尝试在装满颗粒的柱子上使用溶剂来分离从植物中提取的化合物(树叶色素)。茨维特用颗粒填满开口的玻璃柱。他发现两种特殊的材料，粉笔末(碳酸钙)和氧化铝很有用。他将样品(混匀植物叶的溶剂提取物)倒入柱中，并让样品流过颗、粒床。随后加入纯溶剂。随着样品由于重力自上而下流过柱子，可看到不同颜色的谱带被分开，因为有些组分比另外一些移动得快。他将这些分开的不同颜色的谱带与样品中原有的不同化合物相关联。他还根据每一种化合物对填料的化学亲和性强弱，提出了分析这些化合物的分离规律。与颗粒填料有较强亲和性的化合物移动慢，与溶剂有较强亲和性的化合物移动快。这个过程可这样描述:样品中的化合物在流动的溶剂(流动相)与固体颗粒(固定相)间的分布不一样。这样使每一种化合物以不同的速度移动，从而产生了化合物之间的分离。

制备液相色谱原理

英文名称 preparative liquid chromatograph，即将分析色谱的进样量增大，同时得出大量的所需物质（馏分）的过程，其目的是从混合物中得到纯物质。

制备液相色谱是指采用液相色谱技术制备纯物质，即分离、收集一种或多种色谱纯物质。制备液相色谱中的“制备”这一概念指获得足够量的单一化合物，以满足研究和其它用途。制备液相色谱的出现，使液相色谱技术与经济利益建立了联系。制备量大小和成本高低是制备液相色谱的两个重要指标。

液相色谱法的常见问题

样品准备是成功的关键；在将所有样品加载到自动进样器中之前，必须对所有样品进行过滤，这一点非常重要。当使用UHPLC时，如果不过滤样品，使用亚2微米颗粒的色谱柱进行高效分离时很容易发生阻塞，这一点就尤为重要。对于流动相也是如此，尤其是在使用缓冲区的情况下。

对于样品使用正确的进样溶剂或稀释剂至关重要，溶剂强度应等于或小于流动相起始条件的强度。如果使用太强的溶剂，则会观察到峰分裂和重现性差。如果自动进样器中使用的清洗溶剂太强，可能会观察到类似的问题。