肺缺血再灌注损伤是由于机体组织或在缺血再灌注后导致肺组织迅速损伤。缺血再灌注可能发生在肺,也可能是下肢或腹主动脉等,导致肺泡上皮细胞和肺毛细胞血管内皮细胞受损。
究其原因可能与组织细胞聚集、氧自由基产生和促炎因子释放等病理生理反应有关。
结扎法制备肺缺血再灌注损伤模型常用,因其操作简单、成功率高、实用性强,是研究肺缺血再灌注损伤发病机制和防治保护的关键。
制备
动物模型
肺缺血再灌注损伤是由于机体组织或在缺血再灌注后导致肺组织迅速损伤。缺血再灌注可能发生在肺,也可能是下肢或腹主动脉等,导致肺泡上皮细胞和肺毛细胞血管内皮细胞受损。
究其原因可能与组织细胞聚集、氧自由基产生和促炎因子释放等病理生理反应有关。
结扎法制备肺缺血再灌注损伤模型常用,因其操作简单、成功率高、实用性强,是研究肺缺血再灌注损伤发病机制和防治保护的关键。
制备肺缺血再灌注模型我们选用适龄的SD大鼠,通过结扎手术进行造模。
原位杂交过程
杂交前可进行预杂交,以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同,只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。
靶DNA的变性(对mRNA的原位杂交无需此步)
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤,但同时可能会造成样品形态学的部分破坏,此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性,实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。
如使用热变性方法,可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行:将样品和探针溶液加盖盖玻片,置于烘箱80℃变性,染色体DNA样品处理2min,后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。
肝纤维化动物模型
模型概述:
1. 任何可引起肝损伤的因素长期、反复作用于,均可产生肝细胞变性、坏死,继而肝和纤维组织,导致肝纤维化。
2. 已有化学性损伤、性、生物学、酒精性和营养性肝纤维化模型。每种方法因致病因素不同,给药途径不同,产生的机理、纤维化出现早晚、稳定性、出现率、重复性及机体自然患病过程相似程度等都不尽相同。
1、致模因素对动物模型的影响
应明确研究目的,清楚相应人类疾病的发生、临床症状和发病机制,熟悉致病因素对动物所产生的临床症状和发病情况,致病因素的剂量。
2、动物因素对动物模型的影响
品种、品系、年龄体重、性别、生理状态等
3、实验技术因素对动物模型的影响
实验季节、昼夜过程、深度、手术技巧、实验给药、对照组的影响等。
4、环境因素和营养因素对动物模型的影响
模型的成败往往与环境的改变有密切关系。拥挤、饮食改变、过度光照、噪音、屏障系统的破坏等,任何一项被忽视都可能给模型动物带来严重影响。

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