生物素-酪胺信号放大试剂盒(HRP底物) 酪胺信号放大技术(TSA, Tyramide signal amplification)主要原理是,在过氧0化氢存在情况下,标记在抗0体上的HRP将底物酪胺活化,后者与相邻的蛋白上的酪氨酸残基生成稳定的共价结合,因此这些蛋白(如HRP、抗0体)上会富集大量带有生物素标记的酪胺,使信号被有效放大。生物素为小分子化合物,分子量244。亲
抗备流程
生物素-酪胺信号放大试剂盒(HRP底物) 酪胺信号放大技术(TSA, Tyramide signal amplification)主要原理是,在过氧0化氢存在情况下,标记在抗0体上的HRP将底物酪胺活化,后者与相邻的蛋白上的酪氨酸残基生成稳定的共价结合,因此这些蛋白(如HRP、抗0体)上会富集大量带有生物素标记的酪胺,使信号被有效放大。生物素为小分子化合物,分子量244。亲和素与生物素有极高的亲和力,结合牢固,而且特异性高,每个亲和素可结合4个生物素。用小分子生物素与HRP酶标记的亲和素发生特异性反应,可减小抗原抗0体反应的空间位阻,使反应明显放大。
加生物素化抗0体
1. 去掉缓冲液,擦掉切片周围的液体。
2. 加生物素化抗0体,完全覆盖切片。
3. 室温孵育 30min。
4. 用洗涤液洗去抗0体,用洗涤液润洗 5min。
加亲合素-HRP
2. 加亲合素-HRP,完全覆盖切片。
4. 用洗涤缓冲液洗去亲合素-HRP,用洗涤缓冲液润洗 5min。
显色
1. 加显色液(自备)显色。
可能出现的问题和解决方法
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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
抗0体稀释液,即用于稀释抗0体的溶液。在抗原抗0体反应的实验中,需用已经制备的抗0体检测样本中的抗原,但抗0体试剂的浓度很高,需要稀释合适的倍数后才可以用于检测抗原。
脱脂奶粉
脱脂奶粉容易发霉变质,不利于抗0体的回收和保存;国产milk脱脂不充分会增加背景、拮抗抗原抗0体结合,且不能用来做磷酸化蛋白;不能用于稀释二抗。
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