QuickAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克0隆抗0体。常规多克0隆抗0体制备多使用兔子,不但免0疫针次多、抗原用量大和抗0体产生慢,而且由于技术要求较高而往往需要委
托专门单位制备。使用QuickAntibody免0疫佐剂,任何实验动物人员均可方便地制备小鼠多克0隆抗0体,标准免0疫程序只需要简单地免0疫5只小鼠,即可在五周后获得1ml高质量的
HRP
QuickAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克0隆抗0体。常规多克0隆抗0体制备多使用兔子,不但免0疫针次多、抗原用量大和抗0体产生慢,而且由于技术要求较高而往往需要委
托专门单位制备。使用QuickAntibody免0疫佐剂,任何实验动物人员均可方便地制备小鼠多克0隆抗0体,标准免0疫程序只需要简单地免0疫5只小鼠,即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克0隆抗0体。(强烈推荐使用本佐剂制备小鼠多克0隆抗0体,1ml高质量的小鼠多克0隆抗0体足以满足绝大多数用户的实验需求,包括用于酶联免0疫、免0疫印迹、流式细胞、免0疫组化和免0疫沉淀等)。
QuickAntibody建议常温运输,2~8oC保存,无菌取用,有效期18个月。
抗原制备及纯化
抗原制备: 参照文献[10]制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的,37 ℃ 培养过夜,次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养,当菌液 OD600达 0. 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG,37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验,有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG,37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品,超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化,考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ,可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度(按每针次50μl用量配制)。
备注:推荐使用的抗原用量为
(1)免0疫原性较弱的合成肽每针次10-100μg;
(2)亚单位蛋白抗原每针次1-10μg;
(3)免0疫原性较强的灭活病原微生物和病毒样颗粒抗原每针次1-10μg;
(4)肿0瘤细胞裂解物每针次10-100μg。
2. 37oC水浴中解冻佐剂,充分混匀,无菌条件下取出所需用量(按每针次50μl)与抗原按体积比1:1混匀。
3. 通过后腿小腿肌肉或腹0股0沟皮下0注射免0疫小鼠,每只小鼠注射100μl。
4. 第7天按同样方式加强免0疫1针。备注:每次免0疫佐剂和抗原现配现用
5. 第014天通过ELISPOT、胞内细胞0因子染色、MHC四聚体染色或其他可行方法检测脾0脏或引流淋巴0结中的抗原特异性CD4+ TH1和/或CD8+ CTL反应。

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液,能够非常有效的诱导产生高滴度的抗0体。弗氏完全佐剂含结0核分枝杆0菌的细胞壁成分,可以加强对抗原的抗0体反应。佐剂活性来自于油滴中免0疫原的持续释放,并刺激局部免0疫反应。简单的说,这个注射入哺乳动物皮下之后,会产生炎0症和疼痛。
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