对于生长的组织培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但
cAMP antibody
对于生长的组织培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。
结果计算
样品中cAMP浓度有多种计算方法。X轴表示cAMP标准品浓度，Y轴表示净光密度的平均值或者百分比值。
1 样品和标准品的净光密度(OD)平均值的计算：
净OD平均值 = OD平均值 － NSB孔OD平均值
2 计算不同梯度浓度标准品的结合率占较大结合率(B0孔)的百分比，计算公式 如下：
百分比值 = (净OD平均值/ B0孔OD平均值)×100
3 绘制净OD平均值或百分比值对cAMP标准品浓度的Logit-Log曲线。通过插值即可得到样品中cAMP浓度。
洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
底物是光敏感的，要在临用前现配。
检测前，要打开酶l标仪，使之稳定10分钟以上。
底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
待检样品要澄清，否则会影响结果。
温浴时间应遵守试剂盒规定。
应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Ras被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Ras被激l活。
1.
准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2.
每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3.
一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。
4.
将离心管置于30°C条件下反应30 min并不断搅动。
5.
终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
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