抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定
摘要: 制备抗 果 蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇 mrj 的 生 物 学 功 能，使 用 IPTG 诱 导 重 组 质 粒pET28a-mrj 在大肠杆0菌 Rosetta 中表达，重组蛋白经过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化后免0疫 BALB/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细
pei转染试剂
抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定
摘要: 制备抗 果 蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇 mrj 的 生 物 学 功 能，使 用 IPTG 诱 导 重 组 质 粒pET28a-mrj 在大肠杆0菌 Rosetta 中表达，重组蛋白经过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化后免0疫 BALB/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 融合，经克0隆和筛选获得了能分泌抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆抗0体，通过 ELISA 和 Western Blot 对所获得的抗0体进行鉴定，结果表明所制备单克0隆抗0体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的 MRJ 蛋白，可用于研究 mrj 基因的生物学功能。
关键词: mrj; 细胞融合; 单克0隆抗0体
1. 第21天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。
2. 第35天采微量血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。
3. 若抗0体滴度没有达到要求，可在第42天按同样方式加强免0疫1针。备注：通常情况下小鼠只需免0疫2针，而家兔往往需要免0疫3针。
4. 若免0疫3针，可在第52-56天采微量血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:1000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。备注：佐剂免0疫效果有时也与抗原特性有关，若免0疫3针后仍达不到要求，不建议进行更多针次免0疫。
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甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白，分子量约70，000～72，000道尔顿^，在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成，正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿，亦见于其他多种畸形，如先天0性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等∽J。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏综合征有密切关系一。。因此制备高0效特异的AFP单克抗0体(McAb)具有重要的意义。
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弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗0体。弗氏完全佐剂含结0核分枝杆0菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗0体反应。佐剂活性来自于油滴中免0疫原的持续释放，并刺激局部免0疫反应。简单的说，这个注射入哺乳动物皮下之后，会产生炎0症和疼痛。
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