TwistDx
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。近年来，等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。
等温扩增技术的基因诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测试剂检测病原微生物的一种技术。
包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶基
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TwistDx
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。近年来，等温扩增技术的兴起无疑是对PCR的巨大挑战。
等温扩增技术的基因诊断方法,涉及生物检测技术领域,具体是用体外生物检测试剂检测病原微生物的一种技术。
包括如下步骤:一、对被检样品进行预处理;二、包括目标靶基因数据库的建立;生物信息学的分析比较;基因组多态性的分型处理和简并碱基的运用,获得各种靶基因的特异性引物两对,分别与靶基因中的六个独立区域序列特异性匹配;三、进行等温扩增反应;四、分析判断结果。该方法的优点:不需特殊试剂与设备;高特异性;.灵敏度高;鉴定简便;用途广: 可用于食品、药品、化妆品等领域的质量控制和环境、水质等监测;用于医学临床诊断,用于代谢性疾病和遗传疾病的基因诊断。
恒温扩增技术
应用领域:广泛应用于临床诊断，食品安全检测，动物疾病检测等领域
技术特点:，特异，无需专门设备
类型:取代PCR的恒温核酸扩增技术，目前有应用前景的就是RPA技术，此外也有一些其他恒温扩增技术，主要包括：
1. 滚环核酸扩增( rolling circle amolification，RCA )
2.环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification，LAMP)
3.链替代扩增
4.依赖核酸序列扩增( nucleicacid sequence based amplification ，NASBA)
5.解链酶扩增( helix dependent amplification， HAD)
RPA与LAMP对比
LAMP:环介导等温扩增法的特征是针对目标DNA链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下(60～65℃)、经一个步骤即可完成。
RPA：主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。
TwistDx试剂盒
先说结论:目前的检测仍重度依赖核酸检测(以PCR技术为主)，检测速度较慢(大 部分需要2小时以上)，成本较高，且需要经训练的医护或实验人员来操控设备，因此无法实 现大规模检测。其他已商业化的检测试剂盒绝大多数依靠检测(IgG/lgM),可在10- 20分钟内获取检测结果，成本较低，操作简单，但是准确性较差，有较大的概率出现假阳性与假阴 性的情况，因此仅适用于大量地区粗略统计人数以及比例，或作为核酸检测的辅助指 标，其检测结果无法作为确定检测者与否的决定性指标，而目前能实现检测(10-20分 钟)且确保准确性的方法之一抗原检测，尚未有成熟的产品面世，仅有少数科技公司宣称近完成了产品开发。此外，基于CRISPR的检测技术的试剂盒可以为认为是核酸检测技术与检测 技术的一个折中，准确性高，速度较快，成本较低且操作简单，但由于技术相对新 颖，只有少数公司与研究机构完成了试剂盒的开发，产品尚未大规模推广。
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北京立博泰业科技有限公司
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