细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能
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细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照
结果示例:
图 A 细胞划痕实验图;B,C 细胞迁移和侵袭实验图
小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一 步采用RT- PCR对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和组织蛋白酶K (Cathepsin K )的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP(+)多核细胞形成13天TRAP(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因TRAP在共培养3天时开始表达,而MMP-9和Cathepsin K则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著诱导的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.
2、脂质体转染法操作步骤如下 [方法二]:
(1) 以 5×105 细胞/孔接种 6 孔板 (或 35 mm 培养皿) 培养 24 小时,使其达到 50~60% 板底面积。
(2) 在试管中配制 DNA/脂质体复合物方法如下:
①在 1 mL 无 DMEM 中稀释 PSV2-neo 质粒 DNA 或供体 DNA。
②旋转 1 秒钟,再加入脂质体悬液,旋转。
③室温下放置 5~10 分钟,使 DNA 结合在脂质体上。
(3) 弃去细胞中的旧液,用 1 mL 无 DMEM 洗细胞一次后弃去,向每孔中直接加入 1 mL DNA/脂质体复合物,37℃ 培养 3~5 小时。
(4) 再于每孔中加入 20%FCS 的 DMEM,继续培养 14~24 小时,
(5) 吸出 DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜 10%FCS 的 DMEM,2 mL/孔,再培养 24~48 小时。
(6) 用细胞刮或消化法收集细胞,以备分析鉴定。
3、稳定的脂质体转染方法如下:
(1) 接种细胞同前,细胞长至 50% 板底面积可用于转染。
(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前 (2)、(3) 步骤。
(3) 在每孔中加入 1 mL、20%FCS 的 DMEM,37℃ 培养 48 小时。
(4) 吸出 DMEM,用 G418 选择培养液稀释细胞,使细胞生长一定时间,筛选转染,方法参照细胞筛选法进行。

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