PCR技术的本质是体外核酸扩增,加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
普通的PCR仪
一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。
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PCR技术的本质是体外核酸扩增,加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
普通的PCR仪
一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。
用途:主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的基因进行扩增。
(1)梯度PCR仪: 一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常为12种温度梯度的普通PCR仪。
用途:研究未知DNA退火温度的扩增。
(2)原位PCR:将具有细胞定位能力的原位杂交技术运用于从细胞内靶DNA的定位分析,在细胞内实现基因扩增的普通PCR仪。
用途:用于在细胞的靶DNA所在位置上进行基因扩增。
PCR,中文译为聚合酶链式反应,其实是一种DNA的扩增技术,其扩增效率之高就象核裂变的“链式反应”那样。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热的酶的作用,可以在3个小时内把特定的DNA量提高1000万倍。这种技术一问世,立刻引起了分子生物学研究的一场革命,人们利用这种轰动全世界的技术很快就把微观领域的生物学研究大大地往前推了一步。可以这么说,PCR技术使分子生物学研究一下子获得了突破,而且随着PCR技术的日趋完善,PCR在人类社会生活中的应用也越来越广泛。比如说在“DNA指纹”中我们提到,科学家们只需要一根头发甚至一个细胞就可以完成DNA指纹的鉴定工作,这里实际上就要采用PCR技术,因为一个细胞中的DNA含量实在太少了,人们根本不可能检测到它的指纹
PCR仪是什么以及分类:
通过PCR(聚合酶链式反应)技术,对特定DNA进行扩增的仪器。
普通PCR仪:只进行PCR扩增的PCR仪,实际上是一个温控设备。
实时荧光PCR仪:在普通PCR仪的基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。
普通PCR仪只能实现DNA的扩增,分析检测需要在扩增之后。而扩增后到检测分析的这个过程,因为要将样品中仪器中取出来,所以容易受到污染,同时也容易污染环境。
实时荧光PCR仪:在作为温控设备的同时加入荧光分析系统。
在扩增的同时,通过前期准备工作的时候,PCR扩增体系中加入荧光集团,而后通过荧光信号采集系统实时采集,存储数据,将检测分析步骤集中到仪器上,减少人员后续的检测操作,降低了污染和被污染的风险。

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