PCR实验室为什么会存在气溶胶污染?有什么危害?
PCR实验室中的气溶胶污染来源于两个过程:样本制备过程和PCR扩增过程。
在样本制备过程中,样本液体面与空气摩擦就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管、开盖时、吸样时及加样器的反复吸样都可能形成气溶胶而污染;PCR扩增过程可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR扩增可以产生109拷贝的靶序列,如
方舱实验室净化设计
PCR实验室为什么会存在气溶胶污染?有什么危害?
PCR实验室中的气溶胶污染来源于两个过程:样本制备过程和PCR扩增过程。
在样本制备过程中,样本液体面与空气摩擦就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管、开盖时、吸样时及加样器的反复吸样都可能形成气溶胶而污染;PCR扩增过程可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。
如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化扩增产物就会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统,造成严重的实验室污染,导致检验样本出现假阳性结果,使临床做出错误的判断和决策,进而引发后续一系列的事故和恐慌。
pcr滤芯吸头
测试吸头需使用经校准的移液器
(1)准确性:将n个吸头分别吸取定量的纯水称重,重量与体积的关系按照1 g/mL换算。
(2)气密性:取n个吸头,吸取量程的含有1%甘油的墨水,观察有色液体不出现在滤塞之上,液面相同为合格。
(3)防气溶胶性能:取n个吸头,吸取阳性核酸,反复吹吸10次,换另一个新吸头在阴性纯水中反复吹吸10次,取阴性纯水作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。

(4)污染物质检:取n个吸头,吸取阴性纯水反复吹吸10次,取阴性纯水作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。
(5)抑制物质检:取n个吸头,吸取弱阳性质控物反复吹吸10次,然后进行提取;吸取RNA核酸和DNA核酸反复吹吸10次,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被抑制为合格。
p关于cr实验室一些琐碎的、不可忽略的设计
1.实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。

2.污染的预防与控制
PCR实验室设计的问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由