1.在用 ALP 的 IHC 中，内源性碱性磷酸酶常使靶抗原的特异性染色分辨不清。本品抑制细胞制片、冰冻组织切片和石蜡包埋切片中的内源性碱性磷酸酶。
2.冰冻组织切片和细胞制片如外周血、骨0髓和其它体液包含大量造血干细0胞。对于冰冻组织切片，建议用丙0酮固定。对于血细胞和骨0髓涂片，建议用丙0酮/甲0醇固定。
3.标本的染色依赖于染色前的组织处理。不恰当的固定、冷冻
TMB显色液
1.在用 ALP 的 IHC 中，内源性碱性磷酸酶常使靶抗原的特异性染色分辨不清。本品抑制细胞制片、冰冻组织切片和石蜡包埋切片中的内源性碱性磷酸酶。
2.冰冻组织切片和细胞制片如外周血、骨0髓和其它体液包含大量造血干细0胞。对于冰冻组织切片，建议用丙0酮固定。对于血细胞和骨0髓涂片，建议用丙0酮/甲0醇固定。
3.标本的染色依赖于染色前的组织处理。不恰当的固定、冷冻、融化、洗涤、干燥、加热和切片可能产生假阳性。假阳性结果也可能由坏死和变性的细胞产生的交叉反应。
1. 检测细胞或组织中是否含有内源性过氧化物酶的方法：将组织切片水化后，加入底物DAB，如果变为棕色，说明组织切片含有过氧化物酶，需要封闭内源性过氧化物酶活性。
2.检测细胞或组织中是否含有内源性碱性磷酸酶的方法：将组织切片水化后，加入底物BCIP/NBT，如果变为棕色，说明组织切片含有内源性碱性酶，需要封闭其活性。
3.影响过氧化物酶的分子有血红素蛋白如红细胞中的血红蛋白，肌肉细胞中的肌红蛋白，粒细胞和单核细胞中的细胞色素及肝0脏和shen脏之中的触媒。
操作步骤
石蜡切片
1. 脱蜡：二甲0苯，室温，2 次，每次 5～10min。
2. 水合 、、95%、90%、80%、70%乙醇、蒸馏水，每级 3min。
3. 在洗涤缓冲液中润洗 10min。
4. 如有必要，封闭内源性过氧化物酶（含 0.3% H2O2 无水甲0醇）
5. 继续通用步骤。
冰冻切片
1. 空气中干燥切片，至少 1hr
2. 用前用合适的固定液固定，如果要延长保存时间，固定后在空气中干燥 1hr。 单独包装在铝箔袋中，–70°C 干燥保存，用前从冰箱取出，室温放置至少 1hr。
3. 浸入洗涤缓冲液中 10～15min。
4. 如有必要，封闭内源性过氧化物酶（含 0.3% H2O2 无水甲0醇）。
5. 继续通用步骤。
注意事项
1. 用辣根过氧化物酶时不要使用含有叠氮钠的试剂。
2. 避免使用含次氯酸的去污剂。
3. 设阳性对照、阴性对照和试剂对照。
4. 不要使用卵清蛋白作为切片粘连剂，使用明胶或多聚赖氨酸。
5. 孵育过程中不要使片子干掉。
6. 洗涤后洗涤液尽量去净。
7. 用低熔点石蜡以减少抗原变性（> 60°C）。
8. 用新鲜配制的 4%缓冲多聚甲醛可更好保存抗原活性。
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