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慢病毒浓缩信息推荐 博特龙公司

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慢病毒浓缩












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Western Blot-抗0体检测技术服务

一、服务内容

1、从动物细胞、人或动物组织、细菌、植物等样品中提取蛋白,重组蛋白、血0清、培养上清等样品

2、对样品中蛋白进行半定量分析

3、Western blot检测

(1) 电泳:聚丙0烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品

(2) 湿法转印(BLOTING:Tank Transfer)

(3) 杂交:用抗0体鉴定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)

(4) 化学发光检测(ECL),胶片曝光,TotalLab Quant软件读取IOD值(可选)












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抗0体亚型鉴定原理:

抗0体亚型鉴定的原理是利用双抗0体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克0隆抗0体或特异亲和纯化的单克0隆抗0体的类和亚类(可区分出 IgG1﹨IgG2a﹨IgG2b﹨IgG3﹨IgM﹨IgA)。采用小鼠抗0体共有位点的二抗包被微孔板,与加入的培养上清中的小鼠抗0体结合,再加入HRP 标记的抗小鼠各类、亚类的抗0体来分别反应,zui后用 TMB 底物系统显色并用稀硫酸终止,再通过酶0标仪检测吸光度来判断被测单克0隆抗0体的类或亚类。





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取血:

免0疫一周后,可以耳动脉取血检测抗0体效价。因为起初几次免0疫产生的抗0体的效价比较低,头两次取血,够检测用即可。在三次免0疫后,可以获得较高0效价的抗0体,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否则会造成兔子贫0血。

前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血,室温过夜析出血0清。

zui后一次取血可以采用颈动脉放血,具体操作如下:

1、家兔仰卧于兔架上固定头部,用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。

2、沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm,分离皮下结缔组织,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作,如碰到小血管出血,可用止血钳止血)。

3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织,暴露出颈总动脉后用弯头眼0科镊使之游离,剥离神经和结缔组织。

4、于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。

5、用小拇指垫在血管下,用尖头眼0科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断),插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱。

6、松开止血钳,使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。









选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的骨0髓瘤细胞因缺乏次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死0亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死0亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄 piao呤鸟piao呤磷酸核糖转移酶,并具有骨0髓瘤细胞能无0限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。






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