RPA技术的基本原理
RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩
进口Milenia HybriDetect 2T公司
RPA技术的基本原理
RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，TwistAmp exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。
TwistDx的未来
RPA核酸检测技术被誉为可替代PCR的犀利单分子检验技术，因为其灵敏，，对设备要求低，操作简易等特点。自其被开发出来之后，-直被广大科研工作者津津乐道。2009年，较大种子公司孟山都与TwistDx公司合作进行作物检测项目，旨在提高作物移交转让效率。近年来TwistDx根据RPA检测特点， 通过在基础体系中填加不同酶和探针，开发出多款研发型和实用型检测产品，以实现多样化的RPA应用。
TwistDx试剂盒
我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低，高的容易检测，低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍，达到可以检测出来的浓度。基本操作如下：
01 收集咽拭子等病毒样本，通过试剂打碎保护病毒的蛋白质壳子，萃取病毒RNA。一方面是萃取，另一反面，打碎之后就没有了性，相对安全一些。
02 由于这次新冠是单链RNA病毒，所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是常见格式，同一个视频不同格式，意思都一样，可以互相转换。
03 常规PCR反应，加热到94℃把DNA拉链拉开，之后再55℃-60℃让引物，就是拉链扣分别套在两条拉链上，再升温到72℃让拉链自己，用左拉链做模板造一个右拉链，用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环，RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。
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