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液相色谱HPLC是如何工作的？
在柱层析中，溶剂在重力作用下滴入装有吸附剂的色谱柱中。液相色谱是一种改进的柱色谱。在高达400个大气压的高压下，泵输送溶剂通过色谱柱。柱吸附剂或固定相通常是由固体颗粒（如二氧化硅或聚合物）制成的颗粒材料。
与柱色谱相比，利用泵输送，不仅可以分析，而且可以使用更小的颗粒作
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液相色谱HPLC是如何工作的？
在柱层析中，溶剂在重力作用下滴入装有吸附剂的色谱柱中。液相色谱是一种改进的柱色谱。在高达400个大气压的高压下，泵输送溶剂通过色谱柱。柱吸附剂或固定相通常是由固体颗粒（如二氧化硅或聚合物）制成的颗粒材料。
与柱色谱相比，利用泵输送，不仅可以分析，而且可以使用更小的颗粒作为柱填料。粒子越小，其表面积更大，通过固定相与流动相及样品组分之间的相互作用，可以更好地实现混合物中各组分分离。流动相通常是溶剂（如水、、）的混合物。
混合物的组分由于与吸收剂颗粒的相互作用的程度不同而彼此分离，在此过程中不同组分的洗脱速率不同，从而导致组分流出色谱柱时分离。与柱色谱相比，液相色谱自动化程度高，灵敏度高。
反相液相色谱
柱内填充二氧化硅颗粒，并对其进行改性，通过将长的碳氢链（8～18个C原子）附着在其表面来实现其非极性。使用极性溶剂，例如水和醇的混合物，。由于极性溶剂和混合物中的极性分子之间具有强烈的吸引作用，混合物中的极性化合物将更快地通过色谱柱。非极性分子在通过色谱柱的过程中速度会减慢。它们主要通过范德华分散力和疏水作用与烃基形成不同程度的吸引力。它们在水流动相组分中的可溶性也较低，有助于它们与烃基的相互作用。
液相色谱仪常见故障解决方案
如何排除液相色谱仪气泡溢出的故障？
流动相内产生都无法清除不断产生的气泡，主要是因为过滤器长期沉浸于铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯冲洗半小时即可。
液相色谱仪峰面积重复性不好怎么回事？
主要原因可能有进样阀漏液、加样针不到位或液量不足。针对种情况，处理时应对更换进样阀垫圈；对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积；样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞；色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
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