试纸条操作步骤
1.根据检测样品数量取出相应数量的胶体金检测卡,并在胶体金检测卡.上做好标记。每根胶体金检测卡只能用于单次、单个样品的检测。
2.PCR或RPA扩增后,用带滤芯的吸头取适量扩增产物到新的PCR管中,用稀释液(Tris-HCL 0.05M , pH8.0或者PBS 0.01M , pH7.4)或纯水稀释
2-10倍,根据实际情况选择合适缓冲液,摸
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试纸条操作步骤
1.根据检测样品数量取出相应数量的胶体金检测卡,并在胶体金检测卡.上做好标记。每根胶体金检测卡只能用于单次、单个样品的检测。
2.PCR或RPA扩增后,用带滤芯的吸头取适量扩增产物到新的PCR管中,用稀释液(Tris-HCL 0.05M , pH8.0或者PBS 0.01M , pH7.4)或纯水稀释
2-10倍,根据实际情况选择合适缓冲液,摸索较佳稀释倍数,吹打混匀后进行检测。
3.吸取100uL稀释的扩增产物滴加在胶体金检测卡点样孔中。
4.根据试纸条显色的情况直接读取检测结果,质控线( C线)显色后3-10min内观察结果。
5.记录检测结果,将试纸条密封丢弃在安全处。
试纸条结果判定
1.阳性(+) :
试纸条出现一条红色条带,位于质控线(C线);-条红色条带,位于检测线(T线)。阳性结果表明样本中含有待检测的核酸片段,且其数量≥试纸条的低检出量。当目的核酸产物浓度较低时,试纸条C线显色呈红色, T线呈淡红色,甚至浅粉色条带,该结果也应判定为阳性。当目的核酸产物浓度较高时,试纸条C线显色呈红色, T线呈红色,该结果也应判定为阳性。
2.阴性(-) :
试纸条质控线(C线)出现-条红色条带, 检测线(T线)没有条带。阴性结果表明样本中不含目的核酸片段,或其数量试纸条的低检出量。
3.无效:
试纸条质控线(C线)和检测线(T线)均未出现条带,提示所用的试纸条或扩增试剂可能已经损坏、失效或操作有误。
此时,应仔细阅读说明书,重新扩增和检测。如果问题仍然存在,应立即停止使用同一批号的产品,并与当地供应商联系。
试纸条原理
CRISPR 用探针一端标记生物素，另外一端同时标记 FAM 和 TAMRA 作为 Report1； 一端标记生物素，另外一端同时标记 FAM 和 DIG 作为 Report2。当样品中探针被切开 后，生物素端及未被切开的完整探针会通过 SA（链亲和素）磁珠吸附去除，处理后上 清只留下探针的双标记物端即 FAM-TAMRA 和 FAM-DIG，通过试纸条即可检测出对应 被切断的探针，切断探针含量越高，胶体金颜色越深。
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