武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低,孵育时间过短 提高抗1体浓度,孵育时间不能少于60分钟 试剂超过有效使用期 及时更换
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武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低,孵育时间过短 提高抗1体浓度,孵育时间不能少于60分钟 试剂超过有效使用期 及时更换试剂 操作中,滴加试剂时缓冲液未沥干,致 使试剂稀释 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液(但防止切片干燥) 室温太低,15℃ 若室温15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟(或4℃冰 箱过夜) 蛋白封闭过度 封闭时间不要超过10分钟 4、染色阴性 原因 解决办法 操作步骤错误 重新试验,设立阳性对照 组织中无抗原 设立阳性对照片,以验证实验结果 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗与二抗种属无误
IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab)。每个Fab都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc段,无抗1体活性,但具有IgG特有的抗原性。
IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个Fab双体,称F(ab')2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似Fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。
IgM是由五个单体组成的五聚体,含 10个重链和10个轻链,具有10个抗原结合价,由于空间位置的影响,只表现为五个抗原结合价。IgM分子量约为900000,IgG分子量约为150000。
4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。NT-proBNP是BNP激1素原分裂后没有活性的N-末端片段,与BNP相比,半衰期更长,更稳定,其浓度可反映短暂时间内新合成的而不是贮存的BNP释放,因此更能反映BNP通路的激1活。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗1体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗1体的来源为抗血1清,包被和酶标用的抗1体1好分别取自不同种属的动物。如应用单克1隆抗1体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗1体一起保温反应,作一步检测。
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