转印电泳的一抗和二抗
转印电泳的一抗和二抗
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一抗孵育：将LG用稀释液稀释到适当的浓，在摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间）
洗膜：用PBST或者TBST洗膜5 X 5min，如果预实验中发现背景过高，可以增加洗膜时间或洗膜次数
二抗孵育：
蛋白电泳槽厂家
转印电泳的一抗和二抗
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一抗孵育：将LG用稀释液稀释到适当的浓，在摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间）
洗膜：用PBST或者TBST洗膜5 X 5min，如果预实验中发现背景过高，可以增加洗膜时间或洗膜次数
二抗孵育：二抗是辣根过氧化物酶(HRP)标记的LG, 摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可适当降低延长二抗孵育时间）
洗膜：用PBST或者TBST洗膜3 X 10min
T：Tween-20（去污剂）
蛋白电泳问题处理
蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法
1：“微笑”(两边翘起中间凹下)形带，主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所
致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。
2： “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带
主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法：在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。
3：出现拖尾现象
主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心;选择适当的样品缓冲液；电泳缓冲液时间过长，重新配制
4：电泳的条带很粗
电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩的原因。
处理办法：适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压
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核酸电泳凝胶的染色
核酸电泳凝胶的染色
凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用溴化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。
银染法的灵敏度较高，可如下操作:
(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;
(2) 双蒸水洗1-2次;
(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，室温反应15-30分钟;
(4) 充分水洗;
(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;
(6) 用5%冰醋酸终止反应。
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