电泳实验技术原理
电泳实验的技术原理
以下内容由北京龙方科技有限公司为您提供，希望对同行业的朋友有所帮助。
电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和
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电泳实验技术原理
电泳实验的技术原理
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电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。
带电颗粒在电场中泳动的速度称迁移率或泳动度。
电泳时，带电颗粒（球形）在介质中受力平衡匀速运动，则有：
v = F阻/f = FE/f = E·q/f = E·q/(6π·r·η)
v — 泳动度 F阻 — 颗粒所受阻力
E — 电场强度 q — 颗粒所带电荷
r — 颗粒半径 η — 介质黏度
FE — 颗粒所受电场力 f — 摩擦系数
由上式可见：泳动度与球形分子半径、介质粘度、颗粒所带电荷以及电场强度有关。 非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动度与粒子形状有关。
核酸电泳
核酸电泳凝胶的制备和电泳步骤
操作方法如下:
(1) 根据所需要的凝胶的大小将相应的凝胶托盘按正确位置放置在制胶器内;
(2) 称取适量琼脂糖，置电泳缓冲液中，加热使琼脂糖溶解;
(3) 待溶液冷至60℃，加入10mg/ml EB贮存液，使终浓度达0.5mg/ml;
(4) 在距离胶模底板0.5-1mm处放置电泳梳，将琼脂糖溶液倒入胶模中，厚度约3-5mm，注意避免产生气泡;
(5) 凝胶完全凝固后，移去梳子和透明胶，将凝胶放入电泳槽。加入TBE缓冲液使恰好没过胶面约1mm;
(6) 将DNA样品与1/6体积加样缓冲液混合后，加入样品槽中;
(7) 接通电源，使样品槽在负极端，用1-5v/cm的电压，电泳适当时间;
(8) 电泳结束后，可将含EB的凝胶直接放在紫外线检测仪上观察，并拍照记录，也可将不含EB的凝胶在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分钟，再如上观察和拍照，记录结果。
核酸电泳染色液
核酸电泳常用染色液
1、溴化乙锭（ethidium bromide, EB）
较为常用的核酸荧光染料，可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCI2中5min，使非结合的EB褪色，这 样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。
2、吖啶橙（acridine orange, AO）：
吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。
3、亚甲蓝（methylene blue）
可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，而且操作时间长。染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，较低检测量为 250ng。
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