武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
目的构建通用型植物GFP标签蛋白表达载体,研究蛋白质的细胞内定位对蛋白质组学和代谢组学
亚细胞定位公司
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
目的构建通用型植物GFP标签蛋白表达载体,研究蛋白质的细胞内定位对蛋白质组学和代谢组学等研究的意义。方法构建2种GFP标签蛋白质表达载体,分别在GFP的N和C端预留位点,以目的基因。利用该基因载体,分别内切酶Fok I的切割结构域与MS2噬菌体外壳蛋白MCP的串联蛋白（Fok I：MCP：Fok I,FMF）至GFP的N和C端,得到FMF与GFP的融合蛋白GFP：FMF和FMF：GFP,其中FMF的N端带有细胞核定位信号。利用农介导植物瞬时表达侵染本氏和洋葱表皮细胞,观察GFP荧光表达情况。结果成功构建了2种融合了目的基因和GFP的表达载体p ER35GFP-FMF和p ER35FMF-GFP。激光共聚焦结果显示侵染了只含GFP载体的农的细胞,可在细胞核和细胞质中检测到GFP的绿色荧光,而侵染了含核定位信号FMF：GFP和GFP：FMF 2种融合蛋白载体的农的细胞,只在细胞核中观察到绿色荧光。结论该载体系统可运用于研究蛋白质在植物细胞中的亚细胞定位,具有简单、高效和通用性的特点。
胞质Ca~(2+)是重要的第二信使,通过Ca~(2+)结合蛋白产生磷酸化信号级联,调控下游基因表达。钙依赖而钙调素不依赖的蛋白激酶(calcium-dependent/calmodulin-independentprotein kinases,CDPKs)是一类仅在植物和部分原生生物中存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在钙信号转导中具有重要功能。越来越多的证据表明,CDPKs广泛参与植物生长发育、病原防御、非生物环境胁迫等生理反应的信号传递过程。目前在水稻中已发现31个CDPKs基因,但功能明确的只有少数几个基因,本研究的目的就是利用超量表达和RNA干涉(RNA interference,RNAi)技术分析水稻OsCPK2、OsCPK15和OsCPK29的功能,为利用基因工程技术培育水稻新品种提供新的基因资源和理论指导。本研究的主要试验结果如下: 1.通过RT-PCR方法检测了OsCPK2、OsCPK15和OsCPK29三个基因在粳稻品种日本晴分蘖期的根、成熟叶片、穗尖至剑叶叶枕距离分别为0 cm、0-1cm、1-3 cm、3-5 cm、5-8 cm、8-12 cm、12-16 cm、16-20 cm、20-25 cm、25-30 cm、灌浆期稻穗(命名为P1-P12)中的表达谱。试验结果显示:OsCPK2和OsCPK29时期稻穗中表达量较高,在成熟叶片和P12时期稻穗中表达量很低,在分蘖期的根和幼穗中不表达;而OsCPK15在所检测的各个组织和时期中表达量均很高。
盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis C.H.Wrigh t),是我国特有的甾体类药源植物,也是世界上薯蓣皂甙元含量的资源植物。近些年,由于人类的过度采挖,野1生盾叶薯蓣资源濒临枯竭,而人工栽培种存在皂甙元含量降低,种质退化等问题。细胞和基因工程技术可望为盾叶薯蓣的品种改良提供一个新的途径。本实验筛选了盾叶薯蓣易组织培养的基因型,并以其三种外植体—幼胚诱导的胚性愈伤,花序愈伤和花序作为转化受体,研究了根癌农介导的盾叶薯蓣转化的各种影响因素,获得了转基因植株,初步建立了根癌农介导的盾叶薯蓣转化体系,为通过转基因技术对其进行品种改良的研究奠定了技术基础。
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