DNA电泳技术原理
DNA电泳技术原理
根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用EB嵌入DNA分子后在紫外下显色。
琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
1） 在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。由于糖一磷酸骨架在结构上的重复性质，相同
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DNA电泳技术原理
DNA电泳技术原理
根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用EB嵌入DNA分子后在紫外下显色。
琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
1） 在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。由于糖一磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
2） 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。
3） 溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。
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电泳技术原理（以琼脂糖凝胶电泳为例）
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首先介绍使用的载体--琼脂糖。
琼脂糖是线性的多聚物，基本结构是1,3连结的β-D-半乳呋喃糖和1,4连结的3,6-脱水α-L-半乳呋喃糖。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶，这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高，凝胶性能越好。质量较好的琼脂糖强度通常在1200克/cm2以上（1%胶浓度）。
电泳技术与病毒
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不同大小的蛋白质和核酸可以通过聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳分离开来。在多数电泳技术中，每一种蛋白质或者核酸会形成一个条带。电泳技术的原理在于不同分子量的分子在凝胶中移动速率不同。将大小未知的蛋白质或者核酸分子在凝胶中的位置与相同凝胶中大小已知的分子比较，就能估计未知分子的大小。SDS-PAGE是在聚丙烯酰胺凝胶中在SDS去污剂存在情况下屏蔽掉蛋白质带电不同，从而估计蛋白质分子量。
复杂的病毒成分可以按照双向电泳进行分离，即先按照蛋白质等电点进行分离（等电聚焦电泳），再依据蛋白质分子量进行第二向的分离（SDS-PAGE）。
核酸或者蛋白质经过电泳分离的谱型可以通过将其从凝胶上转移（印迹）到一层固相膜上。如果转移的是DNA，就叫sourthern印迹技术，用以纪念它的发明者Edwin Southern；如果是RNA分子，就叫Nouthern blot，如果是蛋白质分子就是Western Blot。
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