液相色谱仪是属于易学难用的仪器,特别讲究“正确使用”和经验。液相工作者接触多的是流动相,流动相也是造成液相色谱各种问题的主要源头。液相色谱常见的故障一是堵,二是漏。下面就这两分别展开讨论(流动相以甲1醇为例,色谱柱以C18为例) 。
为何会堵
“堵”的表现现象就是柱压异常升高,直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端,主要原因就是流动相里有杂质,杂质的主要来源就是
液相色谱仪
液相色谱仪是属于易学难用的仪器,特别讲究“正确使用”和经验。液相工作者接触多的是流动相,流动相也是造成液相色谱各种问题的主要源头。液相色谱常见的故障一是堵,二是漏。下面就这两分别展开讨论(流动相以甲1醇为例,色谱柱以C18为例) 。
为何会堵
“堵”的表现现象就是柱压异常升高,直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端,主要原因就是流动相里有杂质,杂质的主要来源就是细菌。
漏液:
液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系,内部压力很高,但外部却能保证一滴不漏。如果某个部件发生漏液,那就是故障所在。
漏液的原因分两种:
接触硬件不当:在更换零件如流路管或换柱时,换的接头接口不匹配,造成漏液。因为不紧密的安装,不仅会引起装置的泄漏,而且有可能对色谱柱造成损坏。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的,甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区别。当然选项用PEEK接头是一较好是一个较好的解决方法,不仅通用性好,而且靠手拧就能保证不漏液。即使是接口本身是匹配的,但是如果操作不当也会漏液,一种不当就是力度把握不好,拧得太紧或太松;另一种不当就是致命的错误:滑丝,这往往是动手能力不太强,螺丝钉很少拧的工作者犯的错误,滑丝的后果不仅是漏液那么简单,常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来实验,那就是拧螺丝。

制备型加压液相色谱,按照色谱柱和样品量的大小,分为:(1)低压液相色谱;(2)中压液相色谱;(3)高压液相色谱;(4)色谱。柱色谱为向玻璃管中填入固定相,以流动相溶剂浸润后在上方倒入待分离的溶液,再滴加流动相,因为待分离物质对固定相的吸附力不同,吸附力大的固着不动或移动缓慢,吸附力小的被流动相溶剂洗下来随流动相向下流动,从而实现分离。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠,没有统一、明确的标准。 色谱柱压通常为2bar(或30psi)左右,对于那些容易分离的简单混合物,由于色谱具有操作简便、经济等优点,常常是实验室的佳选。但色谱不同于一般的层析分离,这种分离没有压力,而分离通常使用瓶装氮气加压,使流动相具有一定的流速,从而缩短了分离时间。 色谱使用的柱子一般是玻璃柱,柱直径为3~10cm.长度为7~15cm。色谱中使用广泛的固定相为硅胶。采用的粒径通常为:25~40μm,40~63μm或63~200μm的球形固定相。其它如键合相、氧化铝、聚酰胺吸附剂也常用作色谱的固定相使用。
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