武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低,孵育时间过短 提高抗1体浓度,孵育时间不能少于60分钟 试剂超过有效使用期 及时更换
IgE ELISA试剂盒
武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低,孵育时间过短 提高抗1体浓度,孵育时间不能少于60分钟 试剂超过有效使用期 及时更换试剂 操作中,滴加试剂时缓冲液未沥干,致 使试剂稀释 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液(但防止切片干燥) 室温太低,15℃ 若室温15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟(或4℃冰 箱过夜) 蛋白封闭过度 封闭时间不要超过10分钟 4、染色阴性 原因 解决办法 操作步骤错误 重新试验,设立阳性对照 组织中无抗原 设立阳性对照片,以验证实验结果 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗与二抗种属无误
1.2.1 抗1体的结构
抗1体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig的轻链是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda)两种型别。Ig分五类,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为 IgG和IgM。Ig由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig的轻链是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda)两种型别。五类Ig的重链结构不同,这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ(gamma)链和μ(mu )链。
重链和轻链的 N端的氨基酸排列顺序因各种抗1体而异,称为可变区,分别用VH和VL表示。两者构成抗1体的抗原结合部位,只与相应的抗原决定簇匹配,发生特异性结合,是抗1体专一性结合抗原的结构基础。
6.透蜡
放入二甲本和石蜡各半的混合液60min,再放入石蜡Ⅰ60分钟、石蜡Ⅱ透蜡30分钟。
透蜡的目的是除去组织中的透明剂(如二甲本等),使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。透蜡应在恒温箱内进行,并保持箱内温度在55-60℃左右,注意温度不要过高,以免组织发脆。一般置于恒温箱0.5h。
透蜡注意事项
(1)尽量保持在较低温度中进行,以石蜡不凝固为度;
(2)透蜡温度要恒定,不可忽高忽低;
(3)操作要迅速,力求在1短的时间内完成石蜡透入过程,以免引起组织变硬、变脆、收缩等。
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