转印电泳（湿转）实验的操作
转印电泳湿转方式的操作介绍
湿转（一般是恒压转印，100V，时间2h左右）：转印缓冲液，三明治结构 ，底层海绵，往上依次是3-4层滤纸，凝胶，膜，3-4层滤纸，海绵
海绵和滤纸在使用前要用转移液浸泡，在制作三明治结构时一定要避免凝胶干燥，滤纸内的气泡要用玻璃棒赶走
膜在用之前都要活化，PVDF膜要先浸泡5S-30s，然后在转移缓冲液中
Western blot批发
转印电泳（湿转）实验的操作
转印电泳湿转方式的操作介绍
湿转（一般是恒压转印，100V，时间2h左右）：转印缓冲液，三明治结构 ，底层海绵，往上依次是3-4层滤纸，凝胶，膜，3-4层滤纸，海绵
海绵和滤纸在使用前要用转移液浸泡，在制作三明治结构时一定要避免凝胶干燥，滤纸内的气泡要用玻璃棒赶走
膜在用之前都要活化，PVDF膜要先浸泡5S-30s，然后在转移缓冲液中平衡，目的是活化膜上的正电基团，NC膜直接在转移液中平衡即可
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转印电泳
转印电泳AG与LG反应的特点：特异性、比例性、可逆性
1，特异性：由抗原决定簇和LG分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。
2，比例性：抗原与LG发生反应需遵循一定的量比关系。
3，可逆性：抗原LG结合形成复合物后，在一定条件下又可解离恢复为抗原与LG的特性。
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蛋白电泳问题处理
蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法
1：“微笑”(两边翘起中间凹下)形带，主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所
致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。
2： “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带
主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法：在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。
3：出现拖尾现象
主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心;选择适当的样品缓冲液；电泳缓冲液时间过长，重新配制
4：电泳的条带很粗
电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩的原因。
处理办法：适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压
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