电泳仪
电泳仪基本内容
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。用具有高分辨率的凝胶电泳分离酶、蛋白质、核酸等大分子的研究工作,对生物化学与分子生物学的发展起了重要作用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有
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电泳仪
电泳仪基本内容
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。用具有高分辨率的凝胶电泳分离酶、蛋白质、核酸等大分子的研究工作,对生物化学与分子生物学的发展起了重要作用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等,分子生物学领域中常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,因此在电场中运动速度不同,根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备,这在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪正是基于上述原理设计制造的。
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电泳的基本原理
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物质分子在正常情况下一般不带电,即所带正负电荷量相等,故不显示带电性。单向电泳常用来进行蛋白和核酸的分离,蛋白的双向电泳用于指纹-识别(即总蛋白成分分析)和细胞里所有蛋白的精准定位。但是在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的离子(或粒子),不同的物质,由于其带电性质、颗粒形状和大小不同,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,因此可使它们分离。
若将带净电荷Q的粒子放入电场,则该粒子所受到的电荷引力为:
F引=E Q (16-1)
在溶液中,运动粒子与溶液之间存在阻力F阻
F阻=6πrηV (16-2)
当F引=F阻时
EQ= 6πrηV
V = EQ/6πrη (16-3)
由上式可以看出,粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)和粒子所带电荷量(Q)成正比,而与粒子的半径(r)及溶液的粘度(η)成反比。
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电泳技术
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若将两个电极插在电解质溶液中,通上直流电,正离子则向负极移动,而负离子向正极移动,这种现象就是我们熟悉的电泳现象,也称“电泳”。概括而言,电泳是指带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。带电荷的质点,在一-定条件的电场作用下,可向一极移动,如带正电荷的质点移向负极。例如蛋白质具有双性电离性质,当溶液pH值大于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,反之则带正电荷,向负极移动。当蛋白质溶液pH值与蛋白质.的等电点相等,净电荷为零时则不移动。
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