吸附层析:指的是层析固定相与流动相在相对移动过程中,溶质和溶剂分子在吸附剂表面上的活性位点相互竞争的吸附过程。
吸附层析常用固定相:氧化铝硅胶活性炭 聚酰胺
吸附层析固定相选择: (1) 样品的溶解性;水溶性样品如糖类化合物、某些苷类用活性炭分离。流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界流体等都称为流动相。黄酮类化合物则主要采用聚酰胺分离,
液相分离
吸附层析:指的是层析固定相与流动相在相对移动过程中,溶质和溶剂分子在吸附剂表面上的活性位点相互竞争的吸附过程。
吸附层析常用固定相:氧化铝硅胶活性炭 聚酰胺
吸附层析固定相选择: (1) 样品的溶解性;水溶性样品如糖类化合物、某些苷类用活性炭分离。流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界流体等都称为流动相。黄酮类化合物则主要采用聚酰胺分离,绝大部分有机化合物可以采用硅胶和氧化铝作为固定相(2) 样品的酸性:硅胶略酸适用于弱酸和中性物质分离,氧化铝适用于碱性物质分离(3) 化合物的极性: (4) 吸附剂对组分的作用
色谱法
定义 色谱法又称色层法或层析法,是分离和鉴定化合物的有效方法。
应用
(1)分离混合物 在中药提取物的有效部位中,往往含有结构相似、理化性质相似的几种成分的混合物,用一般的化学方法很难分离,可用色谱法将它们分开。
(2)精制化合物 在提取、分离得到有效成分时,往往含有少量结构类似的杂质,不易除去,也可利用色谱法除去杂质得到纯品。
(3)鉴定化合物 在一定条件下,纯粹的化合物在薄层色谱或纸色谱中都有一定的Rf值,在气相色谱和液相色谱中有一定的保留时间,所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或利用标准品的对照来初步确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。
研究层析现象而发展的塔板理论,与有机化学实验中的分馏法原理有些相似。洗脱时,增加溶液的离子强度,如改变pH,增加盐浓度,离子被取代而解吸下来。被分馏的有机溶1剂在分馏柱内的填充物上形成许多热交换层,从而把低沸点溶1剂先分馏出来,达到纯化的目的。在层析时用理论塔板数n来衡量层析效能。tR为物质在层析柱上的保留时间,W为洗脱下来的物质峰形的宽度。n值愈大表示层析柱的效能愈高。如用理论塔板高度H表示,则包含了层析柱长度的因子。式中L为层析柱的柱长。H值越大,则柱效越低。此外影响层析分离效果的还有涡流扩散、纵向扩散和传质阻抗等因素。因此选择层析固定相支持物的粒度、均匀度等物理性能,流动相的层析系统和温度等都是做好层析的关键。

分配层析在支持物上形成部分互溶的两相系统。一般是水相和有机溶1剂相。常用支持物是硅胶、纤维素和淀粉等,这些亲水物质能储留相当量的水。被分离物质在两相中都能溶解,但分配比率不同,展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。
离子交换层析支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子,如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。反相层析在吸附层析中,性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。带阳离子基团的,如磺酸基(—SO3H)、羧(—CH2COOH)和磷酸基等为阳离子交换剂。带阴离子基团的,如DEAE—(二胺)和QAE—(四级胺)等为阴离子交换剂。离子交换层析只适用于能在水中解离的化合物,包括有机物和无机物。对于蛋白质、核酸、氨基酸及核苷酸的分离分析有的分辨力。离子交换基团在水溶液中解离后,能吸引水中被分离物的离子,各种物质在离子交换剂上的离子浓度与周围溶液的离子浓度保持平衡状态,各种离子有不同的交换常数,K值愈高,被吸附愈牢。洗脱时,增加溶液的离子强度,如改变pH,增加盐浓度,离子被取代而解吸下来。洗脱过程中,按K值不同,分成不同的区带。
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