武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
ELISA试剂盒操作步骤
1. 加样:标准品设定5个浓度点10个孔,每个浓度设定平行孔,加入50微升不同浓
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武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
ELISA试剂盒操作步骤
1. 加样:标准品设定5个浓度点10个孔,每个浓度设定平行孔,加入50微升不同浓度的标准品,空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔,在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
6.酶免疫测定
酶免疫测定(enzymeimmunoassay)可分为均相(homogenous)和非均相(heterogenous)两种类型。在均相E0IA中可不需进行游离的和结合的标记物的分离而直接测定标记物。例如在某种条件下,抗原抗1体反应后形成的酶标记抗原抗1体复合物中的酶失去其对底物作用的活力,因而测出的酶活力直接反映游离的酶标记物。(2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用,一定要在使用前才混合,如果混合太早,固定时就没有作用了。均相E0IA在临床检验中较少应用。非均相E0IA需行游离的和结合的标记物的分离。如前所述,固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在1971年1初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(enzymelinked immunosorbent assay),简称ELISA,在国内有译作酶联免疫吸附试验的,虽然含义不完全确切,但已习用。
(2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用,一定要在使用前才混合,如果混合太早,固定时就没有作用了。
(3)固定材料时,固定液必须充足,一般为材料块的20~30倍,有些水分多的材料,中间应更换1-2次新液。
(4)材料固定完毕后,保存于严密紧塞或加盖的容器里,同时在容器外上标签,并随同材料在溶液中投入相应的标签,以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字,应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。
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镊子触质粒由硬变韧性为准。
3. 洗涤
材料经固定后,PBS或双蒸水冲洗约3小时。(20,30,30,60)
4. 脱水
材料依次经80%、90%、、各级乙醇溶液脱水,各30min
注意事项:
(1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行,防止吸收空气中的水分。
(2)在更换高一级的脱水剂时,1好不要移动材料以免损坏,可用吸管吸出器皿中的脱水剂,再用吸水吸尽器皿内剩余液,然后于皿中加入高一级脱水剂。
(3)在低浓度酒精中,每级停留不宜太长,否则易使组织变软,助长材料的解体。
(4)在高浓度或纯酒精中,每级停留的时间也不宜太长,否则会使组织变脆,影响切片。
(5)如需过夜,应停留在80%酒精中。
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