武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
三.实验材料
仪器设备:1.酒精灯、三角烧瓶,培养皿;2.镊子、剪刀、剖针;3.双筒解剖显微镜;4.光照培
GH ELISA试剂盒
武汉默沙克生物科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
三.实验材料
仪器设备:1.酒精灯、三角烧瓶,培养皿;2.镊子、剪刀、剖针;3.双筒解剖显微镜;4.光照培养箱或温室;
材料烟1草无菌苗、豌豆幼苗。
试剂
(1)MS培养基,植物激1素:NAA、6-BA等;
(2)饱和漂液(次氯1酸钠);
(3)70%酒精、酒精、酒精棉球;
(4)无菌水
四.实验步骤
豌豆苗的茎尖培养
⑴取发芽6天的豌豆幼苗10株,简取1厘米左右的茎尖,浸入70%的酒精中1分钟,再浸入饱和次氯1酸钠溶液中消毒15分钟,(此步以后要求无菌)用无菌水中冲洗5次,在灭菌的滤纸上吸干水分,放入灭菌的培养皿中。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;第二步,或360搜索“指标+试剂盒”或“指标+ELISA试剂盒”,进入公司产品中心查看详细的产品参数,操作说明等。或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
在反应产物中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※ ,如不将两者分离而测定标记物,测得的结果将为两者之和。因此,游离标记物与结合标记物的分离是标记免疫测定中的重要步骤。可采用多种手段,固相载体是其中之一。如将抗原或抗1体包被在固相载体上,然后再与标记的抗原或抗1体直接反应,结合的标记物被固定在载体上,而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的Ab※除去,结合标记物的测定可在固相上进行。(3)在透明过程中,如果材料周围出现白色雾状,说明材料中的水未被脱净,应退回纯酒精中重新脱水,然后再透明。
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗1体及酶标抗1体结合,而不再形成'夹心复合物'。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗1体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增1高的物质(例如血1清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的1高值。用高亲和力的单克1隆抗1体制备此类试剂可削弱钩状效应。4敏感性在测定血1清中某一物质的含量时,化学比色法的敏感度为mg/ml水平,酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml,免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。
(作者: 来源:)